[发明专利]一种利用烟草质体高效生产虾青素的方法

权利要求书

1.一种利用烟草质体高效生产虾青素的方法，其特征在于，包括以下步骤：

植物表达载体pAXT，通过合成经密码子优化过的来自水仙Narcissus pseudonarcissus的番茄红素-β-环化酶基因NpLyc、Brevundimonas sp.SD212菌株的β-胡萝卜素羟化酶BsCrtZ基因及β-胡萝卜素酮酶BsCrtW基因的密码子进行优化，共同连接到质体表达载体，组成三顺反子结构，由PrrnT7g10启动子驱动。

2.根据权利要求1所述的利用烟草质体高效生产虾青素的方法，其特征在于，所述的植物表达载体pAXT是通过一下方法构建而得：

合成经密码子优化过的源于Brevundimonas sp.strain SD212菌的BsCrtW和BsCrtZ基因的双顺反子结构，BsCrtW前融合了来自噬菌体T7的g10基因SD序列，BsCrtZ前融合人工合成SD序列GGGAGGGATTTC，且BsCrtW和BsCrtZ阅读框之间用BamHI和PstI酶切位点隔开；

将带有IEE的烟草rps16基因的3’UTRNt-Trps16，然后插入到pBluescript KS载体的SacII/NotI位点间；然后将BsCrtW/BsCrtZ双顺反子用NotI/SalI双酶切后插入到Nt-Trps16-IEE后面；

将带有IEE的烟草rbcL基因的3’UTRNt-TrbcL，然后用BamHI/PstI双酶切后插入到BsCrtW后面；

将莱茵衣藻克隆到SalI/XhoI位点之间；

合成密码子优化过的源于水仙花的NpLyc基因，且NpLyc前面融合了烟草核糖体RNA启动子Nt-Prrn及噬菌体T7g10基因的5’UTR，然后将该片段插入到SacI/SacII位点间得到三顺反子结构；

将三顺反子用SacI/XhoI双酶切后插入到pKP9载体得到pAXT载体。

3.应用权利要求2所述的植物表达载体pAXT建立产虾青素转基因植物的方法，其特征在于，包括构建含有NpLyc、BsCrtW和BsCrtZ的烟草质体表达载体，然后用基因枪的方法得到转基因植株，催化植物本身的类胡萝卜素生成虾青素的转基因植株步骤。

4.权利要求3所述的基因NpLyc，BsCrtW和BsCrtZ和载体pAXT在利用烟草质体高效生产虾青素中的应用，其特征在于，所述的转基因烟草是用基因枪将权利要求3所述的重组载体pAXT中的NpLyc，BsCrtW和BsCrtZ导入到烟草质体，再通过植物组织和器官发生途径在壮观霉素选择压力下获得高产虾青素转基因烟草。