[发明专利]获得与低分子含氮有机化合物特异性结合的适配体的方法在审

专利信息
申请号: 201710412759.4 申请日: 2017-06-05
公开(公告)号: CN108118060A 公开(公告)日: 2018-06-05
发明(设计)人: 小野寺真里 申请(专利权)人: 松下知识产权经营株式会社
主分类号: C12N15/115 分类号: C12N15/115;C12N15/10
代理公司: 北京市中咨律师事务所 11247 代理人: 曾祯;段承恩
地址: 日本*** 国省代码: 日本;JP
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摘要:
搜索关键词: 含氮有机化合物 低分子 适配体 单链DNA 复合物 扩增 特异性结合 电泳 电渗流 电泳法 毛细管 分级 制备
【权利要求书】:

1.一种获得与低分子含氮有机化合物特异性地结合的适配体的方法,该方法具备以下工序:

工序(a),制备含有所述低分子含氮有机化合物和DNA文库的水溶液,

工序(b),通过使用电渗流抑制毛细管的电泳将所述水溶液分级,得到含有复合物的级分,所述复合物包含所述DNA文库所含的单链DNA和所述低分子含氮有机化合物,和

工序(c),通过PCR法扩增所述复合物所含的单链DNA,将所述扩增而得的单链DNA作为所述与低分子含氮有机化合物特异性地结合的适配体获得。

2.根据权利要求1所述的方法,进一步具备以下工序:

工序(d),将工序(c)中获得的与低分子含氮有机化合物特异性地结合的适配体进行纯化的工序。

3.根据权利要求2所述的方法,

在工序(c)中的PCR法中,使用被选自生物素和抗生蛋白链菌素中的一方修饰的引物,

在工序(c)中的PCR法中,不仅扩增所述单链DNA,还扩增由所述单链DNA的互补序列构成的互补链,

所述扩增而得的互补链被所述选自生物素和抗生蛋白链菌素中的一方修饰,并且

工序(d)具备以下子工序:

子工序(da1),将表面具有选自生物素和抗生蛋白链菌素中的另一方的磁珠、与所述扩增而得的单链DNA和所述扩增而得的互补链混合,通过生物素与抗生蛋白链菌素的结合而使所述扩增而得的互补链结合在所述磁珠的表面,

子工序(da2),利用磁力来吸引所述磁珠,

其中,在所述子工序(da2)中,

所述扩增而得的互补链和所述扩增而得的单链DNA彼此杂交而得的双链DNA与磁珠的表面结合,并且

所述扩增而得的互补链通过生物素与抗生蛋白链菌素的结合而结合在所述磁珠的表面,

子工序(da3),回收所述磁珠,和

子工序(da4),从结合在所述回收而得的磁珠的表面的所述双链DNA分离所述扩增而得的单链DNA,将所述扩增而得的单链DNA作为所述与低分子含氮有机化合物特异性地结合的适配体进行纯化。

4.根据权利要求3所述的方法,

在所述子工序(da4)中,在所述双链DNA中添加碱性水溶液,从而分离所述扩增而得的单链DNA。

5.根据权利要求2所述的方法,

工序(d)具备以下子工序:

子工序(db1),将工序(c)中得到的所述与低分子含氮有机化合物特异性地结合的适配体与低分子含氮有机化合物混合,获得水溶液,

子工序(db2),将工序(db1)中得到的水溶液通过使用电渗流抑制毛细管的电泳进行分级,得到含有复合物的级分,所述复合物包含工序(db1)中得到的所述水溶液所含的单链DNA和所述低分子含氮有机化合物,和

子工序(db3),通过PCR法扩增所述工序(db2)中得到的级分所含有的复合物所含的单链DNA,将所述扩增而得的单链DNA作为所述与低分子含氮有机化合物特异性地结合的适配体进行纯化。

6.一种从DNA文库提取所述DNA文库所含有的与低分子含氮有机化合物特异性地结合的适配体的方法,该方法具备以下工序:

将含有所述DNA文库和低分子含氮有机化合物的水溶液通过使用电渗流抑制毛细管的电泳进行分级,获得含有复合物的级分的工序,所述复合物包含所述DNA文库所含有的与低分子含氮有机化合物特异性地结合的适配体和所述低分子含氮有机化合物。

7.根据权利要求1所述的方法,

所述低分子含氮有机化合物为可卡因。

8.根据权利要求1所述的方法,

所述低分子含氮有机化合物是选自酞菁、卟啉和它们的衍生物中的1种化合物。

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