[发明专利]一种神经细胞无血清培养基及其应用

说明书

本发明涉及一种神经细胞无血清培养基及其应用，神经细胞无血清培养基包括以下成分：基础培养基D‑MEM；生长因子：碱性成纤维生长因子，终浓度：0.1‑10μg/ml；表皮生长因子，终浓度：0.1‑10μg/ml；血管内皮生长因子，终浓度：0.1‑10μg/ml；脑源性神经营养因子，终浓度：0.01‑1μg/ml；蛋白质：牛血清白蛋白，终浓度：0.001‑0.1％；转铁蛋白，终浓度10‑500μg/ml；激素：胰岛素，终浓度：1‑100μg/ml；类胰岛素生长因子1，终浓度：0.1‑10μg/ml；皮质酮，终浓度：1‑100μg/ml；黄体酮，终浓度：0.1‑10μg/ml；其它物质：大豆胰蛋白酶抑制剂，终浓度：0.1‑20μg/ml；丁二胺，终浓度：1‑100μg/ml；亚硒酸钠，终浓度：1‑1000μg/ml。与现有技术相比，本发明为大鼠神经细胞培养提供了更为高效和可靠的无血清培养基。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种细胞培养基，尤其是涉及一种神经细胞无血清培养基及其应用。

背景技术

神经细胞是近代神经学科中研究重点之一，在体外特定环境中，通过培养可以连续地直接观察神经细胞或神经胶质细胞的形态、生长、分化、迁移、突触形成、理化改变以及对环境的反应。实验中常用有血清培养基体外培养原代大鼠的海马神经元细胞和皮层神经细胞进行相关的研究工作。由于神经细胞培养相对困难，存活率低，非神经细胞比例过高，不同细胞培养批次间可重复性差，由此影响了实验结果的可靠性。

导致上述神经细胞培养问题的主要原因有动物血清中的一些成分抑制神经细胞的分化和生长、每批次培养液中的成分不一致、实验人员培养细胞的熟练程度等。为了解决这些问题，开发高质量的各种成分确定的无血清培养基势在必行。

发明内容

本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种神经细胞无血清培养基及其应用，本发明提供的神经细胞无血清培养基尤其适用于培养原代大鼠神经元细胞，即作为培养原代大鼠神经元细胞的无血清培养基。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术方案：优化无血清培养基中的各种成分，并将优化后的无血清培养基用于培养大鼠海马神经元细胞和大鼠皮层神经细胞。

本发明的技术方案具体包括以下内容：

技术方案一，提供一种神经细胞无血清培养基，包括以下成分：

基础培养基D-MEM；

生长因子：碱性成纤维生长因子(bFGF)，终浓度：0.1-10μg/ml；表皮生长因子(EGF)，终浓度：0.1-10μg/ml；血管内皮生长因子(VEGF)，终浓度：0.1-10μg/ml；脑源性神经营养因子(BDNF)，终浓度：0.01-1μg/ml；

蛋白质：牛血清白蛋白，终浓度：0.001-0.1％；转铁蛋白，终浓度10-500μg/ml；

激素：胰岛素，终浓度：1-100μg/ml；类胰岛素生长因子1(IGF-1)，终浓度：0.1-10μg/ml；皮质酮，终浓度：1-100μg/ml；黄体酮，终浓度：0.1-10μg/ml；

其它物质：大豆胰蛋白酶抑制剂，终浓度：0.1-20μg/ml；丁二胺，终浓度：1-100μg/ml；亚硒酸钠，终浓度：1-1000μg/ml。

所述的基础培养基D-MEM为来自于Thermo-Fisher公司的产品，产品目录号：11995065。

所述的神经细胞无血清培养基的pH值调节至7.4。

技术方案二，提供上述神经细胞无血清培养基的配制方法，每100ml神经细胞无血清培养基配制方法如下，其他体积的培养基按比例放大或缩小进行配制：

取90ml的DMEM培养液，加到一个干净的200ml烧杯中；