[发明专利]一种控制大肠杆菌中质粒复制的方法在审
| 申请号： | 201710413737.X | 申请日： | 2017-06-05 |
| 公开（公告）号： | CN107142272A | 公开（公告）日： | 2017-09-08 |
| 发明（设计）人： | 黄小罗;方惠敏;张丽华;柳振宇 | 申请（专利权）人： | 南京金斯瑞生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/55 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司32218 | 代理人： | 夏平,李晓峰 |
| 地址： | 211100 江苏省南京*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 控制 大肠杆菌 质粒 复制 方法 | ||
1.一种控制大肠杆菌中质粒复制的方法，其特征在于：包括如下步骤：
步骤1：在被调控质粒R的复制起始区，选择一段20bp的靶序列N20，其中靶序列的3’端相邻的序列为NGG；
步骤2：在大肠杆菌细胞内表达一个Cas9蛋白的失活突变体dCas9蛋白以及转录出针对被调控质粒R复制起始区靶序列N20的gRNA。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1中靶序列的选择在质粒R复制区的正链或负链上，该靶序列具有与大肠杆菌基因组上的序列不同源的特点。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤2中gRNA的基因序列为：N20+GTTTTAGAGCTAGAAATAGCAAGTTAAAATAAGGCTAGTCCGTTATCAACTTGAAAAAGTGGCACCGAGTCGGTGCTTTTTT。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤2中dCas9蛋白可以通过插入染色体上的dCas9基因来表达或通过带有不同于待调控的R质粒复制子的质粒来表达。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤2中gRNA的表达可以通过插入染色体上的gRNA的靶基因来转录或通过带有不同于待调控的R质粒复制子的质粒来转录。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：选择转录针对不同靶序列的gRNA来实现对质粒复制不同程度的调控。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：选择对dCas9的表达以及gRNA的转录进行调控，以实现对质粒复制不同程度的调控。
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