[发明专利]一种利用番茄斑萎病毒NSm基因鉴定烟草抗性的方法

说明书

本发明涉及一种利用番茄斑萎病毒NSm基因鉴定烟草抗性的方法，属于植物保护技术领域。所述NSm基因含有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。NSm是激发含有抗性位点RTSW的烟草产生抗病反应的无毒基因。采用农杆菌瞬时表达系统，在烟草叶片中瞬时表达NSm基因，通过检测供试烟草是否表现过敏反应判断供试烟草是否含有RTSW抗性位点。本发明能够快速、准确地鉴定出烟草对番茄斑萎病毒病的抗性，可应用于烟草抗病育种、抗病基因定位和克隆。

技术领域

本发明属于植物保护技术领域，进一步属于烟草病毒病抗性鉴定技术领域，具体涉及一种利用番茄斑萎病毒NSm基因鉴定烟草抗性的方法。

背景技术

番茄斑萎病毒属（Orthotospovirus）病毒是寄主范围最广、发生最为严重的一类植物病毒，其代表种番茄斑萎病毒（Tomato Spotted Wilt Virus, TSWV）已对云南烟区的烟叶生产构成了较大的威胁。最近几年从云南各地(州、市)县采集样品检测结果看，云南全省烟草上TSWV均有分布并有扩大和加重的趋势。而更让人忧虑的是目前云南省的烤烟主栽品种均不抗TSWV，田间调查发现现有的主栽烤烟品种K326、红花大金元、云烟87等均能被TSWV侵染，成为TSWV流行、爆发的潜在因素。TSWV常用的防治手段主要依赖防治传毒介体蓟马，但由于蓟马具有发育历期短、个体小易隐蔽、对杀虫剂极易产生抗药性等的特点，所以现有的防治措施难以取得理想的控制效果，因而，选育抗TSWV的烤烟品种是最经济、最有效的手段。

野生烟草资源含有丰富的抗性基因。研究表明花烟草(Nicotiana alata)对TSWV具有很好的抗性。接种TSWV仅在接种叶表现过敏性坏死症状，在系统叶中检测不到病毒的存在。经过一系列的常规杂交和回交转育，研究人员已将该抗性基因从花烟草抗性转育至烤烟品种中，育成抗病育种中间材料Polalta。N. alata和Polalta对TSWV的抗性是由显性的单基因（命名为RTSW）位点控制。

在经典遗传学中，基因型控制的植物抗病性常常是由来源于植物的抗病基因R (resistance)与相应的来源于病原物的无毒基因Avr (avirulence)互作所决定的，即“基因对基因”学说。Avr基因的克隆和鉴定不仅有助于阐明抗病植株的抗病机制，而且由于Avr基因和R基因的对应关系，更有助于抗病基因的克隆，更迅速的锁定R基因的类型。因为单独表达Avr基因即能在抗性植株上引起过敏性反应，比起接种病毒更方便、快捷，鉴定结果更准确。因此Avr基因在抗病育种的应用将加速抗性品种的鉴定和选育。现有的结果表明番茄Sw-5b基因是典型的R基因，TSWV的NSm为其对应的Avr基因。辣椒Tsw基因也具备R基因的特点，其对应的Avr基因是TSWV的NSs基因。但是来源于野生烟草N. alata中抗性基因RTSW对应的TSWV Avr基因还未见报道。