[发明专利]蓝舌病病毒型特异性竞争ELISA检测试剂盒及其应用有效
申请号: | 201710415171.4 | 申请日: | 2017-06-05 |
公开(公告)号: | CN107271667B | 公开(公告)日: | 2019-01-22 |
发明(设计)人: | 唐丽杰;王丽;周晗;臧明鑫;李一经;姜艳平;崔文;徐义刚;刘敏;乔薪瑗 | 申请(专利权)人: | 东北农业大学 |
主分类号: | G01N33/569 | 分类号: | G01N33/569;G01N33/558;G01N33/577 |
代理公司: | 北京科龙寰宇知识产权代理有限责任公司 11139 | 代理人: | 孙皓晨;马鑫 |
地址: | 150030 黑龙*** | 国省代码: | 黑龙江;23 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 蓝舌病 病毒 特异性 竞争 elisa 检测 试剂盒 及其 应用 | ||
本发明公开了一种蓝舌病病毒型特异性竞争ELISA检测试剂盒及其应用。所述试剂盒包括以下两组组分:组分I中包括包被蓝舌病病毒抗原I的酶标板和用于蓝舌病病毒型特异性检测的单克隆抗体I,所述的单克隆抗体I由杂交瘤细胞株8B3G11分泌产生;组分II中包括包被蓝舌病病毒抗原II的酶标板和用于蓝舌病病毒型特异性检测的单克隆抗体II,所述的单克隆抗体II由杂交瘤细胞株8B5D4分泌产生。本发明利用制备的两株8型BTV VP2单克隆抗体8B5D4以及8B3G11建立了蓝舌病病毒型特异性检测的联合竞争ELISA检测方法,该检测方法短时间内可以用于初步区分不同型蓝舌病感染的动物血清,实验条件要求低,适合于大规模的BTV血清抗体检查。
技术领域
本发明涉及一种用于蓝舌病毒检测的试剂盒,特别涉及一种用于蓝舌病病毒型特异性检测的竞争ELISA检测试剂盒,还涉及其在蓝舌病毒检测中的应用,本发 明属于病毒检测技术领域。
背景技术
蓝舌病(bluetongue,BT)是由呼肠孤病毒科环状病毒属蓝舌病病毒(BTV) 引起的经媒介昆虫(库库蠓、伊蚊等)传播的动物传染病。易感动物主要为牛、绵 羊、山羊、鹿、骆驼等。世界卫生组织(OIE)规定其为必须呈报疫病,中国规定其为 一类传染病。BTV最早发现于1876年,呈世界性分布。目前已从非洲、欧洲、亚 洲、北美、南美和大洋洲的多个热带、亚热带和温带地区国家分离到BTV,并且其 分布范围不断扩大。
蓝舌病病毒(bluetongue virus,BTV)是双链RNA病毒,其基因组由10个线 性双链RNA片段组成,共编码10种蛋白,包括7种结构蛋白(VP1-VP7)和4个 非结构蛋白(NS1、NS2、NS3/NS3a、NS4)。VP2蛋白是BTV是BTV血清型的主 要决定因素。不同血型间VP2的氨基酸序列差异从22.4%到73%不等。
随着蓝舌病病毒的不断变异目前已发现27种蓝舌病病毒血清型,不同血清型 之间交叉保护力较差。目前国内外没有能对BT进行有效防治的疫苗,因此防控BT 的重要措施是建立针对不同血清型的鉴别诊断方法。蓝舌病有多种检测方法,但每 种方法各有其优缺点,例如:免疫荧光试验和病毒中和试验需对病毒进行分离培养, 操作过程繁琐费时,并且存在容易散毒等生物安全问题,荧光定量PCR方法成本较 高,对检测设备和人员能力均有较高要求,琼脂糖凝胶扩散试验特异性较低。而目 前以单克隆抗体为基础的竞争ELISA检测方法(C-ELISA)为OIE推荐的最佳检 测方法。
本发明采用两株针对8型BTV VP2蛋白的单克隆抗体作为竞争性抗体与待检 测抗体竞争,从而建立了用于蓝舌病病毒型特异性检测的C-ELISA检测方法,并通 过抑制率大小来判断待检测抗体的数量,同时验证该方法的敏感性、特异性和重复 性。本发明建立了一套灵敏、特异、高通量的检测方法,为我国蓝舌病的快速检测 提供技术支持,以确保我国畜牧业的健康发展。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种蓝舌病病毒型特异性竞争ELISA检测 试剂盒及其在BTV型特异性检测中的应用。
为了达到上述目的,本发明采用了以下技术手段:
本发明的一种蓝舌病病毒型特异性竞争ELISA检测试剂盒,包括以下两组 组分:
组分I中包括包被蓝舌病病毒抗原I的酶标板和用于蓝舌病病毒型特异性检 测的单克隆抗体I,所述的单克隆抗体I由杂交瘤细胞株8B3G11分泌产生,所述 的杂交瘤细胞株8B3G11保藏在中国典型培养物保藏中心,地址在武汉大学,其 微生物保藏号为:CCTCCNo.C201770;所述的蓝舌病病毒抗原I为蓝舌病病毒 8型VP2蛋白或是含有SEQ ID NO.1所示抗原表位的VP2蛋白的片段;
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