[发明专利]一种红树植物木果楝真菌来源的吲哚二萜类化合物及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及一种红树植物木果楝真菌来源的吲哚二萜类化合物及其制备方法与应用，其中所述吲哚二萜类化合物具有如下化合物1‑3所示的结构：本发明化合物1‑3对肿瘤细胞A549、Hela、HepG2均显示出一定的抑制活性，有望开发为抗肿瘤药物。

技术领域

本发明属于海洋真菌次级代谢产物领域，具体涉及一种红树植物木果楝真菌来源的吲哚二萜类化合物及其制备方法与应用。

背景技术

红树植物生长于热带亚热带潮间带，其生存环境具有高压、高盐、低氧等特点，使得其内生真菌具有独特的代谢途径，进而具有产生结构新颖、生物活性多样的化合物的能力，其代谢产物具有抗菌、抗肿瘤、免疫调节、酶抑制等多种药用价值，是潜在的微生物药物开发资源，因此，红树植物内生真菌将成为新药研发的重要资源之一。

采用人工培养发酵的方法，从红树植物内生真菌中获得有重要抗菌活性的次级代谢产物，具有环境友好、可持续发展等特点，能有效解决药物开发过程中的药源等关键性问题，因此具有独特优势。

发明内容

本发明提供一种海洋真菌Eupenicillium sp.HJ002，该真菌分离自木果楝，其中木果楝是发明人于2015年9月采集自海南东寨港红树林自然保护区。本发明所述海洋真菌Eupenicillium sp.HJ002的菌种保藏信息：保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏日期：2016年12月21日；保藏编号：CGMCC No.13373；分类命名：正青霉Eupenicillium sp.。

本发明提供一种红树植物木果楝真菌来源的吲哚二萜类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述吲哚二萜类化合物具有如下化合物1-3所示的结构：

本发明提供一种制备上述吲哚二萜类化合物1-3的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)配制种子培养基，将海洋真菌Eupenicillium sp.HJ002菌株接入种子培养基，26～28℃，培养3～4天得种子培养液；

(2)将步骤(1)得到的种子培养液接入发酵培养基中，26～28℃静置培养21～28天得发酵物；

(3)将步骤(2)得到的发酵物中的发酵液和菌体分离，发酵液用等体积的乙酸乙酯萃取2～4次，合并乙酸乙酯相后减压浓缩得到浸膏；

(4)步骤(3)得到的浸膏经过减压硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯作为洗脱剂进行梯度洗脱，洗脱梯度分别为100:0、90:10、80:20、70:30、60:40，50:50、40:60、30:70、20:80、10:90、0:100，每个梯度收集两个柱体积，根据极性大小分成6个组分，其中梯度100:0～90:10洗脱得到的为组分1，梯度80:20～70:30洗脱得到的为组分2，梯度60:40～50:50洗脱得到的为组分3，梯度40:60～30:70洗脱得到的为组分4，梯度20:80～10:90洗脱得到的为组分5，梯度0:100洗脱得到的为组分6，其中组分4先经正相硅胶柱层析，洗脱剂为石油醚：乙酸乙酯＝5:1-2:1的混合溶剂，洗脱2-5个柱体积，减压浓缩后再经Sephadex LH-20凝胶柱层析，洗脱剂为CHCl₃:MeOH＝1:1的混合溶剂，洗脱3-6个柱体积，减压浓缩后再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为Waters C18，9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH:H₂O＝80:30-75:25，依次得到化合物3和化合物2；组分5先经Sephadex LH-20凝胶柱层析，洗脱剂为MeOH，洗脱3-6个柱体积，减压浓缩后再经高效液相色谱HPLC制备，色谱柱为Waters C18，9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH:H₂O＝72:28，得到化合物1。