[发明专利]一种液质联用定量检测小儿消食片中槟榔碱含量的方法

权利要求书

1.一种液质联用定量检测小儿消食片中槟榔碱含量的方法，其特征在于，包括步骤(1)样品制备，(2)标准曲线制备，(3)采用液相色谱-质谱联用检测槟榔碱含量；

所述(1)样品制备的步骤包括：取本品若干片，研细后取约0.6g，精密称定，置25ml量瓶中，加0.9％氯化钠注射液定容至刻度，置磁力搅拌器上以850r/min转速，搅拌5min；即得浓度为24mg/ml供试品混悬液；

精密移取供试品混悬液3ml，置EP管中，超声30min后，0.22μm MICRO PES聚醚砜水系膜过滤，精密量取续滤液500μl、甲醇490μl及内标储备液10μl，置EP管中，混匀，作为供试品进样溶液；

所述内标贮备液中内标为地西泮；

所述(2)标准曲线制备的步骤包括：分别精密量取氢溴酸槟榔碱对照品贮备液5，20，50，100，200μl，并分别加入内标贮备液10μl，补足稀释剂适量至终体积为1000μl，制成一系列标准曲线溶液，采用(3)液相色谱-质谱联用检测的方法检测，记录每个浓度的氢溴酸槟榔碱对应的峰面积；以氢溴酸槟榔碱和内标的峰面积比值为纵坐标，以氢溴酸槟榔碱的浓度为横坐标X，制备氢溴酸槟榔碱的线性回归方程；

所述(3)采用液相色谱-质谱联用检测的步骤包括：

(a)液相色谱条件色谱柱：C18柱；流动相：A：10mmol/l乙酸铵溶液，用甲酸调pH至5.2；B：甲醇；洗脱方式：梯度洗脱；洗脱梯度程序如下：0～0.5min，以体积比15％B；2.1～3.0min，以体积比90％B；3.1～6min，以体积比15％B；

(b)质谱条件质谱采用Agilent 6430三重四极杆质谱仪，电喷雾正离子源，多反应监测分析模式(MRM)；

所述(a)液相色谱条件中，色谱柱为Agilent Poroshell 120SB-C18色谱柱，4.6mm×75mm，2.7μm，样品检测时间：6min；流速：1.0ml/min；进样量：5μl；柱温：40℃；

所述(b)质谱条件中，干燥气：N₂；干燥气流速：10L/min，干燥气压力：45psi，干燥气温度：350℃，毛细管电压：4000V；定量离子对槟榔碱：[M+H]⁺m/z 156.1/44.2，碎片电压：100V，碰撞能量：13eV；内标地西泮：[M+H]⁺m/z 285.1/193.1，碎片电压：150V，碰撞能量：30eV。

2.如权利要求1所述的一种液质联用定量检测小儿消食片中槟榔碱含量的方法，其特征在于，所述氢溴酸槟榔碱对照品贮备液：精密称取氢溴酸槟榔碱对照品15mg，置100ml量瓶中，加稀释剂溶解并定容至刻度，摇匀，精密量取1ml置10ml量瓶中，加稀释剂溶解并定容至刻度，摇匀，得槟榔碱含量约为10μg/ml对照品储备液；槟榔碱重量＝氢溴酸槟榔碱重量/1.5214。

3.如权利要求1所述的一种液质联用定量检测小儿消食片中槟榔碱含量的方法，其特征在于，所述内标贮备液：精密称取地西泮10mg，置100ml量瓶中，加稀释剂溶解并定容至刻度，摇匀，精密量取1ml置10ml量瓶中，加稀释剂溶解并定容至刻度，摇匀，得内标储备液。

4.如权利要求1所述的一种液质联用定量检测小儿消食片中槟榔碱含量的方法，其特征在于，所述稀释剂：0.9％氯化钠注射液-甲醇，以体积比50:50。

5.如权利要求1所述的一种液质联用定量检测小儿消食片中槟榔碱含量的方法，其特征在于，所述10mmol/l乙酸铵溶液：精密称取乙酸铵0.7708g，置烧杯中，精密量取水1000ml，用甲酸调pH至5.2。