[发明专利]一种工程化心肌组织中心肌细胞去分化重塑的方法在审
申请号: | 201710419430.0 | 申请日: | 2017-06-06 |
公开(公告)号: | CN107164317A | 公开(公告)日: | 2017-09-15 |
发明(设计)人: | 王常勇;周瑾;刘伟;沈远;马金旭 | 申请(专利权)人: | 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 |
主分类号: | C12N5/077 | 分类号: | C12N5/077 |
代理公司: | 北京中誉威圣知识产权代理有限公司11279 | 代理人: | 叶立涛,田昕 |
地址: | 100850*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 工程 心肌 组织 细胞 分化 重塑 方法 | ||
1.一种工程化心肌组织中心肌细胞去分化重塑的方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)取哺乳动物肌腱,剪碎,溶于醋酸溶液中,12000rpm/4℃离心后取上清,制成Ⅰ型胶原;
(2)将Ⅰ型胶原,基质胶matrigel,DMEM溶液混合,并用NaOH溶液调为中性,制成混合物;
(3)取哺乳动物的心肌细胞,与步骤(2)制备的混合物混合,接种到孔板中,在的培养箱中预培养0.5-1h后,添加培养基,培养至心肌重塑形成。
2.根据权利要求1所述的工程化心肌组织中心肌细胞去分化重塑的方法,其特征在于,所述醋酸溶液的质量分数为1%;所述Ⅰ型胶原的浓度为2mg/ml。
3.根据权利要求1所述的工程化心肌组织中心肌细胞去分化重塑的方法,其特征在于,所述Ⅰ型胶原,基质胶,DMEM的质量比为5:4:1;所述DMEM溶液的质量浓度为0.1-10%。
4.根据权利要求1所述的工程化心肌组织中心肌细胞去分化重塑的方法,其特征在于,所述NaOH溶液的浓度为0.1M。
5.根据权利要求1所述的工程化心肌组织中心肌细胞去分化重塑的方法,其特征在于,所述哺乳动物的心肌细胞的细胞密度为2-9×106cells/ml。
6.根据权利要求1所述的工程化心肌组织中心肌细胞去分化重塑的方法,其特征在于,所述孔板为12孔板,接种量为每孔1ml。
7.根据权利要求1所述的工程化心肌组织中心肌细胞去分化重塑的方法,其特征在于,所述培养箱的培养条件为37uC/5%CO2。
8.根据权利要求1所述的工程化心肌组织中心肌细胞去分化重塑的方法,其特征在于,所述培养基的成分包括85wt%高糖DMEM和15wt%FBS。
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