[发明专利]一种用于原位杂交或免疫组化检测的阳性参照物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物病理检测领域，具体涉及一种用于原位杂交或免疫组化检测的阳性参照物及其制备方法。

背景技术

在目前临床组织病理诊断和形态学的研究中，原位杂交和免疫组织化学染色已经成为不可或缺的病理诊断辅助技术，在全球临床病理检测中已经得到广泛应用，成为了临床病理检测常规工作中不可缺少的部分。这两种常规检测方法不仅提高了病理诊断的准确性，同时也渗透到了临床和基础学科，在探讨疾病的病因学、发病机制及科研工作中起到了不可估量的作用。如EBER原位杂交检测在多种恶性肿瘤特别是鼻咽癌的病理诊断中起着十分重要的作用，能够确定病毒与组织和细胞的关系，在确定EBV与疾病关系时，EBER原位杂交已成为公认的标准检测方法；又如在乳腺癌组织中，ER、PR及C—erbB-2的免疫组化检测可为患者的预后判断、个体化治疗和靶向治疗方案的选择提供帮助。

但由于原位杂交和免疫组化的染色过程比较复杂，影响染色结果的因素也很多，如一些实验条件的差别及其他技术因素的影响，使得最终的染色结果差别很大，从而影响到病理诊断的结果，目前提高原位杂交和免疫组化染色技术水平的需要越来越迫切，而且任重道远。在日常的病理检测中，为保证结果的稳定和可信，常用的方法是在病理检测中设置阳性对照对实验过程进行质控。临床常用的阳性质控方法主要有两种:一种是每次在对待检组织进行检测时，都使用和待检组织同样的方法将已知表达为阳性的组织(简称阳性组织)制成蜡块，然后将制备的阳性对照蜡块和待检组织蜡块裱在同一张载玻片上，进行检测，该方法阳性对照与待检组织实验条件一致，具有结果可比性好和误差小等优点，但该方法每进行一次检测，均需要制备阳性对照蜡块，不仅需要耗费大量的阳性对照组织、试剂等，而且操作繁琐，工作量大，大大降低了检测效率；另一种是组织微阵列(TMA)技术，通过一次性将多个阳性组织转移到一个新石蜡块上，构建高通量阳性组织阵列的方法在一定程度上提高了检测效率，但依然存在制作过程烦琐，所占的面积较大，需耗费大量抗体试剂等缺点，制约其在临床上的推广应用。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的一个目的是提供一种用于原位杂交或免疫组化检测的阳性参照物，所述阳性参照物镜下观察组织形态完整，使用方便，保存时间长，制备方法简单，节约试剂成本。

本发明的另一个目的是提供一种用于原位杂交或免疫组化检测的阳性参照物的制备方法，所述方法仅需一次操作即可制备出能够供多次检测使用、组织形态完整且保存时间长的阳性参照物，实验操作简单方便、成本节约且大大提高检测效率。

为实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

一种用于原位杂交或免疫组化检测的阳性参照物，由以下方法制备得到：

步骤1：将已知原位杂交或免疫组化染色阳性的肿瘤组织用福尔马林缓冲液固定，切成(1.0-2.0)cm×(1.0-2.0)cm、厚度为(0.3-0.4)cm的组织块，脱水、浸蜡,石蜡包埋制得阳性组织蜡块，HE染色定位，选择阳性组织蜡块上代表性病变组织区域；

步骤2：将石蜡和蜂蜡按质量比50:1的比例混合熔化成蜡液，将所得蜡液注入包埋模具中，冷却，制得空白蜡块，用内径为0.8-2.0mm的组织芯片穿刺针在空白蜡块中穿刺打孔；

步骤3：用内径为0.8-2.0mm的组织芯片穿刺针在步骤1所得的代表性病变组织蜡块穿刺取样后置入步骤2所得的空白蜡块穿刺孔中，加热使加入的病变组织与蜡块融合，冷却，烫熔表面,加上塑料组织包埋框和石蜡液，冷冻，脱模制得组织芯片蜡块；

步骤4：将步骤3所得的组织芯片蜡块切成厚度为4-10um的薄片，二甲苯溶解石蜡，离心，弃上清液，100％乙醇洗涤，离心，弃上清液，95％乙醇洗涤，离心，弃上清液，加入95-100％乙醇稀释至每毫升溶液中含500-1000个组织片段的阳性参照物，4℃保存备用，所述的95％乙醇、95-100％乙醇是指乙醇体积分数为95％、95-100％的乙醇水溶液。

根据本发明所述的阳性参照物，步骤1中所述的福尔马林缓冲液的浓度为10％。

根据本发明所述的阳性参照物，步骤1中所述的组织块为1.5cm×1.5cm、厚0.3cm。

根据本发明所述的阳性参照物，步骤1中所述的脱水为全自动密闭式脱水机脱水。

根据本发明所述的阳性参照物，步骤1中所述HE染色定位的方法是将阳性组织蜡块切片，HE染色，显微镜观察有代表性病变组织，定位。

根据本发明所述的阳性参照物，步骤3中所述的组织芯片穿刺针的直径为1.0mm。