[发明专利]一种核酸杂交化学发光检测方法

权利要求书

1.一种核酸杂交化学发光检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

（1）根据目标核酸的序列设计捕获核酸序列和信号核酸序列，其中捕获核酸序列5’端进行氨基修饰，信号核酸序列5’标记生物素；

（2）将捕获核酸序列固定到基质上；

（3）通过核酸杂交反应，捕获核酸序列和待测目标核酸结合；

（4）通过核酸杂交反应，标记了生物素的信号核酸序列和结合在捕获核酸序列上的待测目标核酸结合；

（5）通过生物素-亲和素的特异性结合反应，把标记了链霉亲和素的微球结合到信号核酸序列上；

（6）通过生物素-亲和素的特异性结合反应，生物素-碱性磷酸酶和微球上的链霉亲和素结合；

（7）通过上述反应固定到基质上的生物素-碱性磷酸酶和发光底物反应，通过化学发光分析仪读取结果，根据检测值和空白对照值的差异来判断待测的样本中是否含有目标核酸。

2.根据权利要求1所述的核酸杂交化学发光检测方法，其特征在于：所述的微球是聚苯乙烯(PS)、交联聚苯乙烯/聚二乙烯基苯 (P[S/DVB])或聚甲基丙烯酸酯(PMMA) 微球，微球的直径为50-500nm。

3.根据权利要求1所述的核酸杂交化学发光检测方法，其特征在于：所述捕获核酸序列和目标核酸的特定片段互补，且长度在15-50个碱基。

4.根据权利要求1所述的核酸杂交化学发光检测方法，其特征在于：所述信号核酸序列和目标核酸的特定片段互补，且长度在15-50个碱基。

5.根据权利要求1所述的核酸杂交化学发光检测方法，其特征在于：所述基质是微孔板、微球、玻片、硅片或微流体芯片。

6.根据权利要求1或5所述的核酸杂交化学发光检测方法，其特征在于：当基质是氨基修饰的微孔板则通过戊二醛固定，当基质是羧基修饰的微球时，通过1-乙基-3-（3-二甲基氨丙基）-碳化二亚胺固定。

7.根据权利要求1或3或4所述的核酸杂交化学发光检测方法，其特征在于：捕获核酸序列和信号核酸序列分别针对目标核酸的不同片段。

8.根据权利要求1所述的核酸杂交化学发光检测方法，其特征在于：所述发光底物是C₁₈H₂₁Na₂O₇P(AMPPD)、C₁₈H₂₀ClNa₂O₇P(CSPD)、C₁₈H₂₀ClNa₂O₇P(ADP-Star)或C₁₈H₁₉Cl₂O₇Na₂P(CDP-Star)。