[发明专利]氨基甲酸酯和菊酯类多残留检测抗原、抗体及其制备方法及应用

权利要求书

1.一种氨基甲酸酯和菊酯类多残留检测抗原，其结构式如式(Ⅰ)所示：

所述载体蛋白为牛血清白蛋白。

2.权利要求1所述氨基甲酸酯和菊酯类多残留检测抗原的制备方法，其特征在于，是采用活泼酯法将氨基甲酸酯类半抗原与牛血清白蛋白偶联，然后将偶联后的产物继续通过活泼酯法与菊酯类半抗原进行偶联，制备获得氨基甲酸酯类和菊酯类多残留检测抗原。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.将氨基甲酸酯类半抗原溶于DMF，形成混合溶液，然后加入EDC和NHS，于室温下搅拌反应；待反应结束后，将上述反应液加入到载体蛋白的pH7.4的磷酸盐缓冲溶液中，继续反应，然后将反应液于室温下透析，制得氨基甲酸酯类完全抗原；

S2.将菊酯类半抗原溶于DMF中，形成混合溶液，然后加入EDC和NHS，于室温下搅拌反应；

S3.将步骤S1制得的氨基甲酸酯类完全抗原溶于DMF溶液中，然后加入步骤S2制备的反应液，于室温下反应，待反应结束后，将反应液进行透析，即得到所述氨基甲酸酯类和菊酯类多残留检测抗原；

所述氨基甲酸酯类半抗原具有式(Ⅱ)所示分子结构：

所述菊酯类半抗原具有式(Ⅲ)所示分子结构：

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤S1所述氨基甲酸酯类半抗原与载体蛋白的质量比为12:1；步骤S1所述氨基甲酸酯类半抗原与EDC和NHS的反应时间为8～24h；步骤S1所述氨基甲酸酯类半抗原与载体蛋白的反应时间为6～24h。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤S2反应时间为8～12h；步骤S3所述菊酯类半抗原与氨基甲酸酯类完全抗原的质量比为10:1；步骤S3反应时间为6～8h；所述DMF、EDC和NHS的质量比按照10:2:1确定。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述氨基甲酸酯类半抗原通过以下步骤制备得到：

S11.将呋喃酚溶于二氯甲烷，然后加入吡啶形成混合溶液，然后向混合溶液中滴加溶于二氯甲烷的对硝基苯氯甲酸酯溶液，整个体系保持4℃以下冰盐浴，待反应结束后，反应液先用稀盐酸振荡洗涤，过柱纯化，得到产物；

S12.将步骤S11制得的产物溶于四氢呋喃，形成四氢呋喃混合溶液，将4-氨基丁酸溶于碳酸氢钠溶液，于冰浴下将四氢呋喃混合溶液逐滴加入碳酸氢钠溶液，待反应结束后，继续于冰浴下加入稀盐酸调反应液pH至4.0，然后用乙酸乙酯提取反应液，然后向提取液中加入无水硫酸钠进行脱水，浓缩，然后进行过柱纯化，收集目标组分，减压蒸馏除去溶剂即得氨基甲酸酯类半抗原。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述菊酯类半抗原通过以下方法制备得到：

S21.将四氯化碳、乙腈和水按照10：10:15的体积比混合后，形成四氯化碳、乙腈和水的混合物备用；

S22.在反应瓶中加入氯氰菊酯2.2g，三氯化钌0.12g，高碘酸钠4.3g和35mL上述制备的混合液，加热，反应，反应结束后，蒸干有机溶剂，将剩余溶液的pH值调为酸性，用乙酸乙酯萃取、水洗；取有机相过柱纯化即制得菊酯类半抗原。

8.权利要求1所述氨基甲酸酯类和菊酯类多残留抗原或权利要求2至7所述方法制备得到的氨基甲酸酯类和菊酯类多残留抗原在制备氨基甲酸酯类和菊酯类多残留抗体或检测氨基甲酸酯类和菊酯类农药残留方面的应用。

9.采用权利要求1所述氨基甲酸酯类和菊酯类多残留抗原或权利要求2至7所述方法制备得到的氨基甲酸酯类和菊酯类多残留抗原制备得到的氨基甲酸酯类和菊酯类多残留抗体。

10.权利要求9所述氨基甲酸酯类和菊酯类多残留抗体在检测氨基甲酸酯类和菊酯类中的应用。