[发明专利]一种利于苹果愈伤的苹果MdARF5基因及其应用在审
申请号: | 201710425692.8 | 申请日: | 2017-06-08 |
公开(公告)号: | CN107164386A | 公开(公告)日: | 2017-09-15 |
发明(设计)人: | 王小非;郝玉金;安建平 | 申请(专利权)人: | 山东农业大学 |
主分类号: | C12N15/29 | 分类号: | C12N15/29;C12N15/10;C07K14/415;C12N15/82;A01H5/00 |
代理公司: | 北京轻创知识产权代理有限公司11212 | 代理人: | 杨立,王博 |
地址: | 271018 山*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 利于 苹果 mdarf5 基因 及其 应用 | ||
1.一种利于苹果愈伤的苹果MdARF5基因,其特征在于,所述MdARF5基因的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的一种利于苹果愈伤的苹果MdARF5基因,其特征在于,所述MdARF5基因的核苷酸序列编码的氨基酸序列如SEQ.ID.NO.2所示。
3.一种利于苹果愈伤的苹果MdARF5基因的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)提取苹果组培叶片中的RNA及反转录;
(2)cDNA全长序列的获得:根据NCBI查到的苹果愈伤中MIEL1基因保守氨基酸序列,设计兼并引物MdARF5-F、MdARF5-R,然后以反转录合成的苹果基因组cDNA为模板进行PCR扩增,得到cDNA全长序列;其中,MdARF5-F序列如SEQ.ID.NO.3所示,MdARF5-R序列如SEQ.ID.NO.4所示;
(3)PCR产物进行回收、载体连接、转化、测序,即得到所述苹果MdARF5基因。
4.根据权利要求3所述的一种利于苹果愈伤的苹果MdARF5基因的制备方法,其特征在于,步骤(2)中,所述PCR扩增的反应体系为:
PCR反应程序为94℃预变性5min;循环参数为94℃变性30s、56℃退火30s、72℃延伸90s,进行32个循环;72℃充分延伸10min。
5.权利要求1或2所述的利于苹果愈伤的苹果MdARF5基因在转基因苹果愈伤中的应用。
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