[发明专利]一种具有靶向功能仿病毒结构高分子囊泡及其制备与应用

说明书

技术领域

本发明属于高分子材料领域，涉及一种具有靶向功能仿病毒结构高分子囊泡及其制备方法，具体涉及一种由透明质酸接枝的两亲性嵌段共聚物与其他两亲性嵌段共聚物混合自组装成具有仿病毒表面突触结构的高分子囊泡及其制备方法与应用。

技术背景

恶性肿瘤是一种是危害人类生命健康的严重疾病，其防治仍依然是当今生命科学研究领域的一个难点。常规的化学疗法是一种全身性的疗法，在相关治疗手段中是首选，适用于大部分实体肿瘤或血液肿瘤。然而，已知的化疗药物仍普遍存在毒性强、对肿瘤靶向识别性差的问题，在杀死肿瘤细胞的同时也对人体正常组织细胞造成很大的伤害。长期治疗更会致使肿瘤细胞产生耐药性，对人体的毒副作用很大等缺点。因此，如何选择性地杀死肿瘤细胞而不造成机体正常组织细胞损伤成为治疗的关键问题。选择性或针对肿瘤细胞进行靶向治疗是解决此关键问题的首选途径。在自然界中，病毒是一种具有靶向性的基因载体，其主要由核酸分子和蛋白构成的外衣壳组成。病毒衣壳能屏蔽环境中的潜在破坏因素，如核酸酶、酸碱度等，具有保护基因遗传物质的功能，同时直接参与病毒的感染过程，实现对宿主细胞表面的特异性吸附。受病毒结构和功能的启示，科学家们一直在不断尝试各种人工仿病毒结构和功能的自组装聚集体用于药物控释和靶向治疗的药物载体，其中以高分子囊泡最为典型。高分子囊泡是一类由双亲性嵌段共聚物有序组合而成的中空球体，其球体的外壳膜层由双亲性分子构成，而内部亲水空腔可以用于包裹药物。高分子囊泡膜结构可分为三层：两个内外侧的亲水层和一个处于内外亲水层中间的疏水层，疏水层由于内外表面的亲水层保持稳定。通常，高分子囊泡是由单一种类的两亲性嵌段共聚物自组装而成，其囊泡表面呈“光滑”状态。而本发明通过两种及以上嵌段共聚物制备的仿病毒核衣壳及表面刺突结构的高分子囊泡是一种非常具有潜力的药物载体。高分子囊泡可通过“特洛伊木马”策略包载基因、药物，并避免其中体内循环中被免疫系统辨识、吞噬。此外，通过嵌段共聚物设计与合成，如对进行功能基团接枝修饰，可使高分子囊泡表面带有特定功能性配体从而具有对特定细胞的靶向性。

目前，同时具有针对肿瘤细胞靶向功能以及仿病毒结构高分子囊泡还未见有公开报道。

发明内容

基于获得结构与功能上仿病毒结构，同时赋予高分子囊泡靶向肿瘤细胞功能的需求，本发明的目的在于提供一种含有透明质酸接枝嵌段共聚物构建的具有肿瘤细胞靶向功能及仿病毒结构的高分子囊泡的制备方法。

本发明的另一目的在于提供由上述方法得到的具有靶向功能仿病毒结构高分子囊泡。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

一种具有靶向功能仿病毒结构高分子囊泡的制备方法，具体包括以下步骤：

S1：将含有氨基的透明质酸(HA)与含有羧基的疏水性聚合物进行酰胺反应，得到透明质酸(HA)接枝的两亲性嵌段共聚物；所述含有羧基的疏水性聚合物在反应之前需进行羧基活化处理；

S2：将透明质酸HA接枝的两亲性嵌段共聚物与其他两亲性嵌段共聚物通过溶剂交换法或水合法制备成具有靶向功能仿病毒结构高分子囊泡。

步骤S1中所述含有氨基的透明质酸是通过二元胺与透明质酸反应得到。所述二元胺的结构为H₂N-R-NH₂，R为有机基团；所述二元胺优选为脂肪二元胺，更优选为丁二胺。

步骤S1中所述含有氨基的透明质酸的具体制备步骤为：

将透明质酸溶于缓冲溶液中，加入二元胺，恒温搅拌，加入还原剂反应，反应完成后透析，冻干，得到端氨基化透明质酸即含有氨基的透明质酸。

所述恒温搅拌的温度为40～60℃，优选为50℃；所述恒温搅拌的时间为20～36h，优选为24h；

所述二元胺优选为1,4-丁二胺；所述还原剂为硼氰化钠；

所述反应的时间为2～4天，优选为3天，所述还原剂分2～4次加入；

所述缓冲溶液优选为醋酸盐缓冲液。

所述透明质酸HA和二元胺摩尔比为1:(1～5)，还原剂与透明质酸质量比为(1～3):5。

步骤S1中所述含有羧基的疏水性聚合物在反应之前需进行羧基活化处理，活化处理具体为：在有机溶剂中，采用活化剂将含有羧基的疏水性聚合物进行羧基活化，得到羧基活化的产物；所述活化剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)与N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)。

所述羧基活化的时间为10～36h，优选为24h。

所述含有羧基的疏水性聚合物、EDC与NHS的摩尔比为(1～2.5):5:5；