[发明专利]一种用于EB病毒荧光定量PCR检测的引物和探针组、及试剂盒

权利要求书

1.一种用于EB病毒荧光定量PCR检测的引物和探针组，其特征在于，包括，

上游引物EB-F：5’CCGGTGTGTTCGTATATGGAG 3’，如SEQ ID NO.1所示；

下游引物EB-R：5’GGGAGACGACTCAATGGTGTA 3’，如SEQ ID NO.2所示；

探针EB-P：5’TGCCCTTGCTATTCCACAATGTCGTCTT 3’，如SEQ ID NO.3所示；探针的5’端标记有荧光基团，3’端标记有淬灭基团。

2.如权利要求1所述的用于EB病毒荧光定量PCR检测的引物和探针组，其特征在于，所述引物和探针根据EB病毒的基因组序列中的靶片段进行设计，该靶片段的序列如SEQ ID NO.4所示。

3.一种用于EB病毒荧光定量PCR检测的试剂盒，其特征在于，包括：核酸提取液、红细胞裂解液、PCR反应液、混合酶液、阴性质控品、临界阳性质控品、强阳性质控品和阳性标准品；所述PCR反应液包括引物和探针；

所述引物为：上游引物EB-F：5’CCGGTGTGTTCGTATATGGAG 3’，如SEQ ID NO.1所示；下游引物EB-R：5’GGGAGACGACTCAATGGTGTA 3’，如SEQ ID NO.2所示；

所述探针为：EB-P：5’TGCCCTTGCTATTCCACAATGTCGTCTT 3’，如SEQ ID NO.3所示；探针的5’端标记有荧光基团，3’端标记有淬灭基团；

所述阴性质控品包括不含EB病毒DNA片段的重组质粒；

所述临界阳性质控品和强阳性质控品均包括含有EB病毒DNA片段的重组质粒；

所述阳性标准品包括含有EB靶片段的重组质粒，该靶片段的序列如SEQ ID NO.4所示。

4.如权利要求3所述的用于EB病毒荧光定量PCR检测的试剂盒，其特征在于，所述核酸提取液包括体积百分比0.1-1％的NP-40和1-10％的chelex-100。

5.如权利要求3所述的用于EB病毒荧光定量PCR检测的试剂盒，其特征在于，所述红细胞裂解液包括质量百分浓度20-50％的蔗糖和体积百分比1-5％的Triton X-100。

6.如权利要求3所述的用于EB病毒荧光定量PCR检测的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应液包括浓度为0.2-0.4mM含dUTP的dNTP、2-7mM的Mg Cl₂、5-20mM的KCl、0.2-1μM的引物和0.1-0.3μM的探针。

7.如权利要求3所述的用于EB病毒荧光定量PCR检测的试剂盒，其特征在于，所述混合酶液包括1-5U的Hotstart Taq酶和0.1-0.5U的UNG酶。

8.如权利要求3所述的用于EB病毒荧光定量PCR检测的试剂盒，其特征在于，所述阳性标准品包括：

阳性标准品1：含有浓度为1.0×10⁴copy/mL的EB靶片段的重组质粒；

阳性标准品2：含有浓度为1.0×10⁵copy/mL的EB靶片段的重组质粒；

阳性标准品3：含有浓度为1.0×10⁶copy/mL的EB靶片段的重组质粒；

阳性标准品4：含有浓度为1.0×10⁷copy/mL的EB靶片段的重组质粒。

9.如权利要求3所述的用于EB病毒荧光定量PCR检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒进行PCR的反应体系为：42℃，2min；94℃，2min；94℃，10sec，58℃，1min，45个循环；数据的采集定在58℃。