[发明专利]一种提高乳酸菌酸胁迫抗性的方法

说明书

本发明公开了一种提高乳酸菌酸胁迫抗性的方法，属于生物工程技术领域。本发明通过在乳酸乳球菌Lactococcus lactis NZ9000中过量表达来源于乳酸乳球菌L.lactis NZ9000的DLDH蛋白，得到了一株酸胁迫抗性能力显著提高的重组乳酸乳球菌L.lactis NZ9000(pNZ8148‑dldh)。在pH 5.5条件下，重组菌株L.lactis NZ9000(pNZ8148‑dldh)的生物量较对照提高约9.53％；pH 4.0条件下胁迫3.5h，重组菌株的存活率为对照的7.3倍。本发明还提供了一种提高酸胁迫抗性的方法，该方法具有良好的工业应用价值。

技术领域

本发明涉及一种提高乳酸菌酸胁迫抗性的方法，属于生物工程技术领域。

背景技术

乳酸菌由于其独特的生理特性被广泛的应用于轻工业、食品、医药及饲料工业等许多行业中。酸胁迫作为乳酸菌生产应用中面临的最广泛存在的一种环境胁迫，严重影响了乳酸菌生理功能的发挥。因此提高乳酸菌的酸胁迫耐受性对于其在发酵生产中的应用有着重要的意义。

二氢硫辛酰胺脱氢酶是一种黄素蛋白，其作用是将二氢硫辛酰胺脱氢转化为氧化型硫辛酰胺，属于氧化还原酶类，提供一些硫族基团，供NAD⁺和NADP⁺接受，从而在生物的能量代谢中起重要作用。

国内外对二氢硫辛酰胺脱氢酶进行了大量的研究，其中研究最多的原核生物为大肠杆菌，而真核生物主要是酵母、猪以及人类。随着研究的深入，研究者不断发现二氢硫辛酰胺脱氢酶在病原体的致病性以及耐药性方面起着重要的作用，同时其还具有较强的免疫原性。

发明内容

本发明的目的是提供一种提高乳酸乳球菌酸胁迫抗性的方法。本发明通过在乳酸乳球菌中过量表达DLDH蛋白，实现了乳酸乳球菌酸胁迫抗性的提高。

本发明解决的第一个问题是提供了一株酸胁迫抗性提高的重组乳酸乳球菌，这株重组菌过量表达二氢硫辛酰胺脱氢酶DLDH。

所述DLDH的氨基酸序列是SEQ ID NO.1所示的序列。

所述DLDH的核苷酸序列，在本发明的一种实施方式中，是SEQ ID NO.2所示的序列。

所述DLDH的核苷酸序列，在本发明的一种实施方式中，来源于乳酸乳球菌Lactococcus lactis NZ9000。

所述重组菌，在本发明的一种实施方式中，以乳酸乳球菌Lactococcus lactisNZ9000为宿主。

本发明解决的第二个问题是提供了一种所述重组菌的构建方法。是将编码SEQ IDNO.1所示氨基酸序列的dldh基因连接到表达质粒上获得重组质粒，再分别转化到宿主菌中获得重组菌。

所述表达质粒为pNZ8148。

所述宿主菌，在本发明的一种实施方式中是Lactococcus lactis NZ9000。

所述构建方法，在本发明的一种实施方式中，具体是：将SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列克隆到表达质粒pNZ8148上，获得重组质粒pNZ8148-dldh，再将重组质粒转化到宿主菌Lactococcus lactis NZ9000中，得到重组菌株Lactococcus lactis NZ9000(pNZ8148-dldh)。

本发明的第三个目的是提供一种提高乳酸乳球菌酸胁迫抗性的方法，是在乳酸乳球菌中过量表达二氢硫辛酰胺脱氢酶DLDH。

所述方法，在本发明的一种实施方式中，DLDH的氨基酸序列是SEQ ID NO.1所示的序列。