[发明专利]一种比率型荧光检测H2S的试剂及其合成方法和应用

权利要求书

1.一种比率型荧光检测H₂S的试剂，其特征在于，是7-(二乙基氨基)-2-氧代-2H-色烯-4-基2-(吡啶-2-基二硫烷基)苯甲酸酯(HS-1)，结构式为：

2.如权利要求1所述的一种比率型荧光检测H₂S试剂的合成方法，其特征在于，步骤为：

(1)在N₂保护下，0℃条件下向1摩尔当量丙二酸和2摩尔当量苯酚的混合物中缓慢滴加过量POCl₃，混合物加热到115℃反应，直到大量HCl气体被释放，上层清液倾倒在水中，用乙酸乙酯萃取，合并有机层，在旋转蒸发仪上蒸发后得棕色油状化合物丙二酸二苯酯；

(2)将1摩尔当量丙二酸二苯酯和1摩尔当量间羟基-N,N-二乙基苯胺溶解在甲苯中，反应液回流7h；反应完成后冷却至室温，有固体析出，过滤，滤饼用正己烷洗涤，干燥，得黄色固体7-二乙胺基-4-羟基香豆素；

(3)将1摩尔当量二巯基吡啶溶于氯仿中，加入1摩尔当量2-巯基水杨酸，滴加1摩尔当量氯化亚砜，搅拌1h，生成淡黄色固体，抽滤，干燥得到化合物2-(吡啶-2-基二硫烷基)苯甲酸；

(4)将化合物1摩尔当量2-(吡啶-2-基二硫烷基)苯甲酸，1摩尔当量7-二乙胺基-4-羟基-香豆素，1摩尔当量1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，和0.1摩尔当量4-二甲基氨基吡啶，加入二氯甲烷中，室温搅拌12h；旋转蒸发除去溶剂并将剩余物过硅胶柱，得到黄色固体7-(二乙基氨基)-2-氧代-2H-色烯-4-基2-(吡啶-2-基二硫烷基)苯甲酸酯。

3.如权利要求1所述的试剂在H₂S检测中的应用。

4.一种比率型荧光检测H₂S的方法，其特征在于，步骤为：

(1)、配制pH＝7.4、浓度为10mM的PBS缓冲溶液，配制2mM的HS-1的DMSO溶液；

(2)、将2000μL pH 7.4的PBS缓冲溶液、5μL HS-1的DMSO溶液加到荧光比色皿中，在荧光分光光度仪上检测，随着待测样的加入，403nm的荧光强度逐渐增强，519nm的荧光逐渐减弱；

(3)、将2000μL pH 7.4的PBS缓冲溶液、5μL HS-1的DMSO溶液加到另外六个荧光比色皿中，分别再加入体积为0、40、80、120、160、200μL的HS^-溶液，在荧光分光光度仪上测定403/519对应的强度比值R为0.27，1.00，2.54，4.31，5.71，6.64，以H₂S浓度为横坐标，以比值R为纵坐标绘制图，得到H₂S浓度的工作曲线；线性回归方程为：R＝0.036c-0.27，c的单位为μM；

(4)、将2000μL pH 7.4的PBS缓冲溶液、5μL HS-1的DMSO溶液加到干净的荧光比色皿中，用微量进样器吸取VμL待测样品溶液，加入到此荧光比色皿中，在荧光分光光度仪上检测，将测得的比值代入步骤(3)的线性回归方程，得到浓度c，待测样品C_待测样＝2000μL×c×10^-6/VμL，即可求得H₂S的浓度。