[发明专利]一种利用电泳筛选靶蛋白‑天然产物多组分复合体的方法在审
| 申请号： | 201710434797.X | 申请日： | 2017-06-10 |
| 公开（公告）号： | CN107246985A | 公开（公告）日： | 2017-10-13 |
| 发明（设计）人： | 李东浩;康英锦;权宁海 | 申请（专利权）人： | 延边大学 |
| 主分类号： | G01N1/28 | 分类号： | G01N1/28;G01N24/08;G01N30/02;G01N30/06 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所11569 | 代理人： | 刘奇 |
| 地址： | 133000 吉林省延*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 电泳 筛选 蛋白 天然 产物 组分 复合体 方法 | ||
1.一种利用电泳筛选靶蛋白-天然产物多组分复合体的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将靶蛋白与天然产物多组分在缓冲溶液中孵化，形成靶蛋白-天然产物多组分复合体混合溶液；
(2)将孵化后的靶蛋白-天然产物多组分复合体混合溶液加入到电泳装置的进样室，所述进样室由两个醋酸纤维素膜组成，所述醋酸纤维素膜的两端分别为正电极室和负电极室，在所述正电极室和所述负电极室中加入缓冲溶液；
(3)在电泳装置两端施加电压，使整个体系形成电场，进行电泳分离；游离的天然产物多组分吸附在醋酸纤维素膜上或溶解在进样室的溶液中，靶蛋白-天然产物多组分复合体穿过醋酸纤维素膜，从进样室迁移到正电极室或负电极室；
(4)将正电极室或负电极室和醋酸纤维素膜中的组分做进一步分析，确认与靶蛋白结合的特定天然产物多组分。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述醋酸纤维素膜的孔径≤0.2μm。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述缓冲溶液为乙酸铵和二甲基亚砜的混合液，所述混合液中乙酸铵的浓度为10mM，二甲基亚砜的体积分数为5％。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)中，进一步分析是指利用液相色谱—串联质谱和核磁共振波谱，确定与靶蛋白结合的特定天然产物多组分。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)孵化的条件为35℃～37℃下孵化30～40min，或在3℃～5℃下孵化2～5小时。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)电压为7～10V。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)的电泳过程在3℃～5℃下进行。
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