[发明专利]一种利用电泳筛选靶蛋白‑天然产物多组分复合体的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种利用电泳筛选靶蛋白-天然产物多组分复合体的方法，具体是指通过电泳技术筛选与靶蛋白结合的特定天然产物多组分的研究方法。

背景技术

目前，结合于靶蛋白的天然产物多组分药物的筛选在精准药物研发领域中有着至关重要的作用。大部分药物以单靶点、单组分、高亲和力为特征，然而单靶点、单组分药物普遍会产生毒副作用和抗药性，因此单靶点、多组分、低选择性的药物在疾病治疗中起越来越重要的作用。目前的药物筛选技术主要有亲和色谱技术、磁珠筛选技术、超滤技术等。但是这些技术主要研究单个靶蛋白单组分的筛选，且需要将靶蛋白固定化，导致覆盖靶蛋白的活性位点，不能有效筛选活性成分。这些技术存在筛选步骤繁琐、费时、费力等缺点，不能有效地对结合于靶蛋白的多组分进行筛选。基于以上问题，需要开发操作简单、无需靶蛋白固定化、且能准确有效地分离出与靶蛋白结合的天然产物多组分的筛选研究方法。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有药物筛选技术中靶蛋白天然产物多组分的筛选效率低、靶蛋白-多组分复合体分离过程复杂而影响筛选结果等不足，而提出了一种能够简单准确地利用电泳筛选结合于靶蛋白的天然产物多组分的研究方法。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案如下：

本发明提供了一种利用电泳筛选靶蛋白-天然产物多组分复合体的方法，包括如下步骤：

(1)将靶蛋白与天然产物多组分在缓冲溶液中孵化，形成靶蛋白-天然产物多组分复合体混合溶液；

(2)将孵化后的靶蛋白-天然产物多组分复合体混合溶液加入到电泳装置的进样室，所述进样室由两个醋酸纤维素膜组成，所述醋酸纤维素膜的两端分别为正电极室和负电极室，在所述正电极室和所述负电极室中加入缓冲溶液；

(3)在电泳装置两端施加电压，使整个体系形成电场进行电泳分离；游离的天然产物多组分吸附在醋酸纤维素膜上或溶解在进样室的溶液中，靶蛋白-天然产物多组分复合体穿过醋酸纤维素膜，从进样室迁移到正电极室或负电极室；

(4)将正电极室或负电极室和醋酸纤维素膜中的组分做进一步分析，确认与靶蛋白结合的特定天然产物多组分。

优选的，所述醋酸纤维素膜的孔径≤0.2μm。

优选的，所述缓冲溶液为乙酸铵和二甲基亚砜的混合液，所述混合液中乙酸铵的浓度为10mM，二甲基亚砜的体积分数为5％。

优选的，所述步骤(4)中，进一步分析是指利用液相色谱—串联质谱和核磁共振波谱，确定与靶蛋白结合的特定天然产物多组分。

优选的，所述步骤(1)孵化的条件为35℃～37℃下孵化30～40min，或在3℃～5℃下孵化2～5小时。

优选的，所述步骤(3)电压为7～10V。

优选的，所述步骤(3)的电泳过程在3℃～5℃下进行。

本发明筛选与靶蛋白结合的天然产物多组分的机理为：靶蛋白与天然产物多组分在缓冲溶液中孵化，特定天然产物多组分与靶蛋白发生特异性结合,形成靶蛋白-天然产物多组分复合体。每种单一靶蛋白都具有不同的等电点，在不同于等电点的pH缓冲溶液中带不同电荷。靶蛋白-天然产物多组分复合体在电场作用下迁移，并穿过醋酸纤维素膜，向正电极室或负电极室移动。没有与靶蛋白结合的天然产物多组分，由于自身所带电荷量小，在电场作用下迁移率小，因此吸附在醋酸纤维素膜上或溶解在进样室的溶液中，从而达到筛选与靶蛋白结合的特定天然产物多组分的目的。

本发明提供的利用电泳筛选靶蛋白-天然产物多组分复合体的方法，能够从天然产物复杂基质中快速筛选与靶蛋白相互作用的多组分，且该筛选方法简单、有效、准确率高。

附图说明

图1为本发明不加电场时的电泳装置和样品状态示意图；

图2为本发明加电场后的电泳装置和靶蛋白-天然产物多组分复合体与游离多组分分离示意图；

其中，1、醋酸纤维素膜，2、天然产物多组分，3、靶蛋白-天然产物多组分复合体，4、电源，5、正电极室，6、负电极室。

具体实施方式

本发明提供了一种利用电泳筛选靶蛋白-天然产物多组分复合体的方法，包括如下步骤：