[发明专利]环介导等温扩增技术检测肺炎支原体的方法

权利要求书

1.肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)的LAMP检测靶点：用于对肺炎支原体进行快速检测的专用引物，即根据Mp(NCBI reference sequence NC_000912.1)的特异性保守靶序列设计的，用以定性检测待测样品中的Mp。

2.根据权利要求1所述的LAMP检测靶点，设计了Mp的专用引物，每套引物包含4条寡核苷酸序列，即F3、B3、FIP和BIP。

3.一种Mp的LAMP检测方法，主要包括以下步骤：反应过程以待测物的基因组DNA为模板，在权利要求1或2所述专用引物的引导下进行LAMP扩增；反应结束后肉眼观察产物是否浑浊；与阴性对照相比，明显出现浑浊物的样本为阳性，阳性产物经离心后在试管底部出现沉淀物若无浑浊现象，则为阴性标本；亦可在反应液中添加1μl的SYBR GREEN(1:100稀释)，在紫外光激发下观察结果，产物呈荧光绿色表示该样品存在支原体感染，颜色无变化表示待测样品中不存在支原体感染；或利用浊度仪监测反应中的浊度变化来判断结果，浊度上升表示待测样品中存在Mp(阳性)，浊度无变化表示待测样品为阴性。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于：所述步骤[1]中的待测样品包括粗提DNA(如煮沸法)、某商品化试剂盒提取的DNA或纯化DNA；根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于25μl LAMP反应体系包括：待测物的基因组DNA 2μl，20mM Tris·HCl(pH 8.8)，10mM KCl，8mM MgSO4，10mM(NH4)2SO4，0.1％Tween20，0.8M甜菜碱(betaine)，1.4mM dNTP each，8U Bst DNA polymerase；引物用量为：5pmol F3和B3，40pmol FIP和BIP。

5.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于LAMP扩增条件为：置55～67℃恒温30～90min，优选为63℃恒温60min。

6.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于SYBR GREEN(1:100稀释)的添加量为1μl。

7.一种Mp的LAMP检测试剂盒，包含有权利要求1或2所述的专用引物。