[发明专利]一种高效杀线虫的组合菌剂的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及农业杀线虫药剂制备领域，具体涉及一种高效杀线虫的组合菌剂的制备方法。

背景技术

根结线虫作为分布广泛、为害严重的一种植物寄生线虫，对农林业生产造成极大的经济损失。根结线虫可直接破坏寄主表皮细胞使作物造成机械损伤，也可通过口针刺伤寄主，分泌有毒物质，形成瘤状根结，影响作物生长。几乎所有的树种容易被这些害虫感染，具体表现为影响宿主植物的根，但也可损害地上部分，包括茎、叶和花。

防治线虫的方法，之前绝大多数在线虫控制方面的尝试包括施用化学驱线虫剂和/或微生物例如某些真菌和细菌，人们发现这些方法类似地通过杀伤线虫而具有控制。但是由于它们的毒性，很多有效的化学驱线虫剂反而污染了环境。因此，很多传统化学驱线虫剂(例如甲基-溴化物和有机磷酸酯类)的使用已经被淘汰，从而产生了对开发替代处理线虫的需求。

微生物菌株是防止线虫危害的一种良好手段，在实际应用中，许多产品因含孢量有限而防效不及化学杀线虫剂，而且单一菌种的发酵液在只能对特定的线虫种类起到作用，并不具备广谱杀线虫的能力。因此，研发一种高效杀线虫的组合菌剂仍然是一项重要的研究内容。

另一方面，由于排放近海海水的污染(污染源中含有大量的氮磷元素)，自2008年以来我国近海海域，尤其是黄海海域，经常发生浒苔爆发事件。浒苔的大规模爆发会带来危害。打捞上来的浒苔并不容易治理，目前并没有合适的处理方式，任由浒苔堆抵，会带来另外的环境污染问题。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种高效杀线虫的组合菌剂的制备方法。本发明的一种高效杀线虫的组合菌剂杀线虫效率高，灭杀线虫的种类所，且灭杀效果长久有效，减轻了线虫的危害，显著提高作为的增产增收，防治率达85-100％。

本发明的技术方案如下。

一种高效杀线虫的组合菌剂的制备方法，包括：

步骤(1)，制备金龟子绿僵菌悬液；将金龟子绿僵菌(Metarhizum anisoplia，保藏编号为CGMCC No.8385，通过商业途径购得)菌种于24℃接种在PDA斜面培养基上培养5-10天，该PDA斜面培养基的配方包括，以重量份数计，土豆粉5-10份、蔗糖1-5份、玉米粉5-20份、MgSO₄·7H₂O 0.1-5份以及K₂HPO₄ 0.2-3份，培养结束后使用去离子水洗涤，洗下液体即金龟子绿僵菌悬液；

制备光合细菌嗜酸柏拉红菌PSB-1悬液(Rhodoblastus acidophilus，保藏编号CCTCC NO.M 206124，通过商业途径购得)，将光合细菌嗜酸柏拉红菌PSB-1菌种置于液体培养基中培养发酵，在1000-4000LX灯光照射培养5-7天，或者在自然光下光照培养15-30天；其中，该液体培养基包括，以重量份数计，蔗糖5-10份、乙酸钾0.1-2份、MgSO₄·7H₂O 0.01-0.2份、KH₂PO₄ 0.02-0.2份、CaCl₂·2H₂O 0.01-0.3份、CaCO3 0.02-0.3份，该液体培养基的pH为6.4-6.8；液体培养所得溶液即光合细菌嗜酸柏拉红菌PSB-1悬液；

制备克鲁丝假丝酵母菌TY9悬液(Candida krusei，保藏编号为CCTCC M 2014435，通过商业途径购得)，将克鲁丝假丝酵母菌TY9接种至液体培养基中培养5-10天，培养温度是25-33℃，该液体培养基包括，以重量份数计，蔗糖10-20份、蛋白胨5-10份、氯化钠1-3份，液体培养所得溶液即克鲁丝假丝酵母菌TY9悬液；

步骤(2)，将步骤(1)获得的金龟子绿僵菌悬液、光合细菌嗜酸柏拉红菌PSB-1悬液、克鲁丝假丝酵母菌TY9悬液按照质量比1∶2∶2.5的比例混合，在混合液中加入占混合夜总重量的5-8％的蔗糖和1-10％土豆粉，获得混合菌液，在1-5℃下保存备用；

步骤(3)，将浒苔粉碎，直径在1-10cm，自然晾晒后备用，得到干燥浒苔；