[发明专利]一种检测大气颗粒物致眼损伤的方法

权利要求书

1.一种检测大气颗粒物致眼损伤的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤，(1)采用四通道大气颗粒物智能采样仪，切割出大气颗粒物，采用聚四氟乙烯滤膜包覆大气颗粒物，将包覆有滤膜的大气颗粒物浸入蒸馏水中，超声振荡后用纱布滤过，干燥后备用；

(2)取步骤(1)备用的大气颗粒物，将大气颗粒物稀释于无菌的PBS中得到大气颗粒物滴眼液，再向大气颗粒物加入苯扎溴铵，保存于4℃冰箱备用；

(3)取体外培养角膜组织细胞，向体外培养角膜组织细胞滴入步骤(2)配置出的滴眼液设置成试验组，并设置空白对照组，将试验组和空白对照组采用荧光素染色、苏木精-伊红染色后，观察体外培养角膜组织细胞损伤情况。

2.根据权利要求1所述检测大气颗粒物致眼损伤的方法，其特征在于，所述步骤(3)中使用浓度为10g·L-1荧光素钠溶液分别滴入1μl至试验组和空白对照组的体外眼角膜组织细胞中，使荧光素钠溶液均匀分布于体外培养角膜组织细胞表面，在裂隙灯显微镜钴蓝光下观察记录角膜染色区出现的破裂情况。

3.根据权利要求1所述检测大气颗粒物致眼损伤的方法，其特征在于，所述步骤(3)中分别将试验组、空白对照组的体外培养角膜组织细胞用质量浓度为4％多聚甲醛溶液固定，然后经石蜡包埋、切片处理，采用苏木精-伊红染色，置入显微镜下观察角膜损伤情况。

4.根据权利要求1所述检测大气颗粒物致眼损伤的方法，其特征在于，该方法还包括步骤(4)，将试验组、空白对照组的人工角膜分别经质量浓度为2.5％戊二醛溶液前固定2小时，质量浓度为1％锇酸溶液后固定1小时，再分别经真空冷冻干燥、乙醇梯度脱水，包埋，经枸橼酸铅和醋酸双氧铀双重染色后于场发射扫描电子显微镜和透射电子显微镜下观察角膜上皮细胞超微结构。

5.根据权利要求1所述检测大气颗粒物致眼损伤的方法，其特征在于，所述步骤(1)中对大气颗粒物切割的粒径为2.5-10μm，将包覆有大气颗粒物的四氟乙烯滤膜裁剪为1cm×1cm，超声振荡45min，经真空条件下冷冻干燥，再于4℃保存备用。

6.根据权利要求1所述检测大气颗粒物致眼损伤的方法，其特征在于，所述步骤(2)中大气颗粒物稀释于无菌PBS中得到大气颗粒物滴眼液的浓度为5-10mg/mL，滴加滴眼液的次数为3次，在向大气颗粒物加入苯扎溴铵时，苯扎溴铵的添加量为0.005-0.1g。