[发明专利]X‑连锁淋巴增殖综合征诊断试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种X-连锁淋巴增殖综合征诊断试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

抗人CD3、CD56、CD8a、SAP的流式荧光抗体、所述抗人SAP的流式荧光抗体的同型对照荧光抗体、抗人SAP的Western Blot抗体以及所述抗人SAP的Western Blot抗体对应的二抗。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述抗人CD3、CD56、CD8a、SAP的流式荧光抗体以及所述同型对照荧光抗体上所带有的荧光标记依次为FITC、APC、Percp Cy5.5、PE、PE。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括抗凝剂、细胞固定剂、细胞破膜剂、流式缓冲液、蛋白裂解液中的一种或多种。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述流式缓冲液的配方为：含有1.8％～2.2％FBS和1.8mM～2.2mM EDTA的1×PBS溶液。

5.权利要求1～4任一项所述的试剂盒在制备诊断X-连锁淋巴组织增殖综合征的产品中的应用。

6.一种使用权利要求1～4任一项所述的试剂盒检测CTL和NK细胞中SAP蛋白丰度的方法，其特征在于，包括：

1).分离待检样本中的外周血单个核细胞及并计数调整细胞浓度；

2).向步骤1)中的细胞中同时加入抗人CD3、CD56、CD8a的流式荧光抗体并孵育；

3).离心，将沉淀与细胞固定剂共孵育；

4).离心，将沉淀与细胞破膜剂共孵育；

5).离心，用流式缓冲液洗涤沉淀后重悬；

6).将重悬后的样品分为两组，分别加入抗人SAP的流式荧光抗体和同型对照荧光抗体并孵育；

7).离心，用流式缓冲液洗涤沉淀后重悬，并用流式细胞仪进行检测；

和/或；

a).分离待检样本中的外周血单个核细胞并用蛋白裂解液裂解收集蛋白；

b).将蛋白使用所述抗人SAP的Western Blot抗体以及所述抗人SAP的Western Blot抗体对应的二抗进行Western Blot实验，读取所得条带的灰度值或荧光值；

其中步骤1)～7)与步骤a)～b)没先后顺序。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，在步骤1)中，所述细胞浓度为3.5～4.5×10⁶/ml。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，在步骤2)中，孵育条件为：

室温避光孵育15～25min。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，在步骤2)中，CD3、CD56、CD8a的抗体的浓度分别为8～12μl/100μl、4～6μl/100μl、4～6μl/100μl；

优选的，抗人SAP的流式荧光抗体和同型对照荧光抗体的抗体浓度均为4～6μl/100μl。

10.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，在步骤b)中，抗人SAP的Western Blot抗体按0.5～1.5：1000添加，室温下摇动孵育1～3h后2～6℃孵育8～16h。