[发明专利]一种荧光探针及其合成方法和在循环肿瘤细胞检测中的应用

权利要求书

1.一种荧光探针，其特征在于，包括荧光基团、组织蛋白酶B的底物和叶酸分子，荧光基团与组织蛋白酶B的底物通过自降解键连接，再与叶酸分子连接；荧光基团在游离状态能被激发光激发，与其它分子共价连接后淬灭。

2.根据权利要求1所述的荧光探针，其特征在于，所述组织蛋白酶B的底物为苯丙氨酸-赖氨酸；所述自降解键由至少两个骨架单元首尾连接形成，骨架单元由氨基苯甲醇、氨基苯二甲醇和氨基苯三甲醇连接组成。

3.根据权利要求1所述的荧光探针，其特征在于，所述荧光基团为若干个。

4.权利要求1～3中任意一条权利要求所述荧光探针的合成方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)以苄氧羰基保护的苯丙氨酸酯与二碳酸二叔丁酯保护的赖氨酸反应，得到赖氨酰苯丙氨酸酯；

(2)将赖氨酰苯丙氨酸酯与氯甲酸异丁酯反应，得到酸酐中间体；

(3)酸酐中间体与荧光基团-赖氨酰苯丙氨酸酯反应，得到连接有荧光基团的中间体；

(4)使用三氟乙酸脱去连接有荧光基团的中间体上的Boc保护基，然后与叶酸在酰胺化试剂体系下发生缩合反应，使叶酸与连接有荧光基团的中间体偶联，再经肼解脱去赖氨酸上的保护基PG1，得到荧光探针。

5.一种循环肿瘤细胞检测方法，其特征在于，所述检测方法基于权利要求1～3中任意一条权利要求所述的荧光探针完成。

6.根据权利要求5所述的循环肿瘤细胞检测方法，其特征在于，所述检测方法中，所述荧光探针与肿瘤样本直接混合孵育检测，或将所述荧光探针制备成脂质体或包裹于纳米材料中，再与肿瘤样本混合孵育检测。

7.根据权利要求5所述的循环肿瘤细胞检测方法，其特征在于，所述肿瘤样本包括血液样本、组织样本或手术中体内待测组织。

8.根据权利要求7所述的循环肿瘤细胞检测方法，其特征还在于，当所述肿瘤样本为血液样本或组织样本时，用缓冲液溶解权利要求1～4中任意一条权利要求所述的荧光探针，将所述荧光探针与血液样本或组织样本在37℃下孵育5min～1h，然后检测荧光强度；

当所述肿瘤样本为手术中体内待测组织时，将权利要求1～4中任意一条权利要求所述的荧光探针直接涂布在体内待测组织上，在特定LED灯照射的引导下进行手术切除肿瘤组织。

9.一种循环肿瘤细胞检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1～4中任意一条权利要求所述的荧光探针和反应缓冲液。

10.根据权利要求9所述的循环肿瘤细胞检测试剂盒，其特征在于，将所述荧光探针制备成脂质体或包裹于纳米材料中。