[发明专利]一种酶法辅助制备泡叶藻多糖的方法

说明书

本发明公开了一种酶法辅助制备泡叶藻多糖的方法，其具体步骤为：1）将泡叶藻洗净、烘干后、粉碎，过60目标准筛得到泡叶藻粉；2）、纤维素酶处理：将泡叶藻粉浸泡于30倍水中，再添加200IU/mL的纤维素酶制剂，并在50℃温浴2h；3）、经水提、除杂提取、除杂、醇沉等步骤得到泡叶藻多糖；4）将泡叶藻多糖复溶于H₂O₂浓度8.6%溶液中、脱色时间4.0 h、脱色温度60℃，脱色后多糖白度值和多糖保留率分别为61.1%、90.0%，此条件下，泡叶藻聚糖白度值、保留率以及免疫刺激活性均处于较优的水平，脱色成本和设备要求较低，有利于泡叶藻多糖的工业化生产。

技术领域

本发明涉及生物制剂的技术领域，尤其涉及一种酶法辅助制备泡叶藻多糖的方法。

背景技术

泡叶藻(Ascophyllum nodosum)，又称岩衣藻，是一种大型的海洋褐藻,主要在北大西洋沿岸生长繁殖。和其他褐藻(比如海带)相似。泡叶藻含有丰富的褐藻胶(alginateacid)(约占藻体所含总糖质的79％)，是工业生产褐藻胶、碘和甘露醇的主要原料之一。除褐藻胶外，泡叶藻还含有约占藻体总糖质的13％的泡叶藻聚糖(ascophyllan)和8％的岩藻聚糖(fucoidan)。在我国，泡叶藻在工业上主要被用作提取褐藻胶的原料；农业生产上用来制作化肥、饲料等；在食品行业中主要用来制作海藻粉。

泡叶藻聚糖，又称泡叶藻糖胶。早在20世纪60年代，挪威科学家Larsen指出泡叶藻中存在一种区别于褐藻胶和岩藻聚糖的多糖硫酸酯，并将其命名为泡叶藻聚糖(ascophyllan)。由于很长一段时间没有从结构及生物活性方面将泡叶藻聚糖与岩藻聚糖相区分，从而忽视了对其进行深入研究。近年来，研究指出泡叶藻聚糖具有多种优良的生物活性，如免疫刺激、抗氧化、抗肿瘤、抗炎症活性等，但传统的泡叶藻多糖提取法提取率只有6％左右且颜色较深对其在食品领域的应用有很大的限制作用。多糖的提取方法有水提法、酸碱提法、微波提取、超声提取、生物酶法等与其他方法相比，酶法辅助提取多糖具有条件温和，操作方便，经济节约等优点。多糖的脱色方法有活性炭吸附、有机溶剂萃取、大孔树脂吸附、H2O2氧化脱色等，不同的脱色方法在不同的多糖脱色过程中呈现不同的效果。

有鉴于此，本发明人研究和设计了一种酶法辅助制备泡叶藻多糖的方法，本案由此产生。

发明内容

本发明的目的在于提供一种酶法辅助制备泡叶藻多糖的方法，旨在提高其提取率的同时对其颜色进行有效脱除，使其在食品领域和生物医药领域有重要的应用价值和良好的开发前景。

为了实现上述目的，本发明解决其技术问题所采取的技术方案是：

一种酶法辅助制备泡叶藻多糖的方法,包括以下步骤：

步骤一、泡叶藻粉的制备：

将泡叶藻洗净、烘干后、粉碎，过60目标准筛，制得泡叶藻粉；

步骤二、纤维素酶处理：

将泡叶藻粉浸泡于10-50倍体积的水中，再添加100IU/mL-300IU/mL的纤维素酶制剂，并在40℃-60℃温浴1h-3h；

步骤三、水提：将步骤二得到的纤维素酶处理液取出，不断搅拌，沸水浸提2h；

步骤四、除杂：将步骤三得到的提取液冷却至室温，在5000×g，20min条件下离心除去藻渣；用HCl调上清液pH至1.3，于4℃下过夜放置，在5000×g，20min条件下经冷冻离心去除沉淀褐藻胶；

步骤五、醇沉：将步骤四得到的上清液用NaOH调至中性后，于4℃下用质量分数为50％的乙醇过夜沉淀，在5000×g的条件下冷冻离心获取沉淀，沉淀过程重复2次，并合并沉淀物，经3500Da分子量截留的透析袋透析后，冷冻干燥获得泡叶藻多糖。