[发明专利]一种混合细胞制剂及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于干细胞技术领域，具体涉及一种混合细胞制剂及其制备方法和应用。

背景技术

糖尿病足是糖尿病一种严重的并发症，是糖尿病患者致残，甚至致死的重要原因之一，不但给患者造成痛苦，而且给患者增添了巨大的经济负担。糖尿病足是指由糖尿病引起的血管病变、神经病变以及感染等综合因素而导致糖尿病患者足或下肢组织破坏的一种疾病状态。缺血性糖尿病足的主要临床表现为下肢缺血，只有肢体供血得以恢复才可能获得愈合机会。糖尿病足的主要治疗方法有干细胞移植治疗。干细胞移植治疗糖尿病足主要是根据干细胞可以在体内分化为血管内皮细胞和平滑肌细胞，分泌大量的促血管生成因子，形成新生血管的原理，将其移植到缺血下肢，使其逐渐分化并形成新生毛细血管，改善和恢复下肢血流，达到治疗下肢缺血的目的。干细胞移植作为治疗血管再生的新疗法，为糖尿病足患者带来了希望。

目前用于治疗糖尿病足的干细胞制剂主要为外周血干细胞制剂。通过采集动员后的外周血，提取得到外周血中的单个核细胞，将单个核细胞中的干细胞进行扩增，从而将扩增后的干细胞制备成外周血来源的干细胞制剂。然而，该技术需要采用的动员剂价格昂贵，而且外周血来源的干细胞数量极少，其分离过程复杂，增殖速度慢。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种价格低廉的混合细胞制剂，克服了现有干细胞制剂中干细胞数量极少，分离过程复杂，增殖速度慢的技术缺陷。

本发明的具体技术方案如下：

本发明提供了一种混合细胞制剂，包括：骨髓干细胞和外周血单个核细胞。

优选地，所述混合细胞制剂中所述骨髓干细胞和所述外周血单个核细胞数量比例为1:1～2:1。

优选地，所述骨髓干细胞使用包含VEGF和EGF的DMEM/F12培养基经全骨髓法培养得到。

更优选地，所述VEGF的浓度为5～10ng/mL，所述EGF的浓度为5～10 ng/mL。

优选地，所述骨髓干细胞为第三代至第五代骨髓干细胞。

优选地，所述混合细胞制剂的剂型为注射剂。

本发明还提供了上述混合细胞制剂的制备方法，将所述骨髓干细胞和所述外周血单个核细胞混合，制得所述混合细胞制剂。

本发明还提供了上述混合细胞制剂或上述制备方法制得的混合细胞制剂在制备治疗糖尿病足药物中的应用。

综上所述，本发明提供了一种混合细胞制剂及其制备方法和应用。本发明采用骨髓作为干细胞的组织来源，通过全骨髓法培养得到数量较多的骨髓干细胞，然后将骨髓干细胞和外周血单个核细胞进行混合，得到上述混合干细胞制剂。与现有外周血干细胞制剂相比，本发明无需价格昂贵的动员剂，也无需复杂的分离过程，制备方法简单可控，可应用于制备缺血性糖尿病足药物。通过本发明技术方案得到的混合细胞制剂包括骨髓干细胞和外周血单个核细胞，骨髓干细胞的增殖速度较快，能够获得较多的干细胞数量，外周血单个核细胞可分泌一些利于血管重建的细胞生长因子，两者合理配伍可协同促进缺血性糖尿病足患者的血管重建，能够进一步促进患者的恢复。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。

图1a为骨髓干细胞CD73的表达流式鉴定图；

图1b为骨髓干细胞CD90的表达流式鉴定图；

图1c骨干细胞CD105的表达流式鉴定图；

图1d为骨髓干细胞CD45的表达流式鉴定图；

图1e为骨髓干细胞CD34的表达流式鉴定图；

图1f为骨髓干细胞CD19的表达流式鉴定图；

图1g为外周血单个核细胞CD3的表达流式鉴定图；

图1h为外周血单个核细胞CD3、CD56的表达流式分布图；

图1i为外周血单个核细胞CD3、CD8的表达流式分布图；

图1j为外周血单个核细胞CD3、CD4的表达流式分布图。

具体实施方式

下面将结合本发明说明书附图对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例只是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本领域技术人员应当理解，对本发明的具体实施例进行修改或者对部分技术特征进行同等替换，而不脱离本发明技术方案的精神，均应涵盖在本发明保护的范围中。

实施例1