[发明专利]一种分选白细胞的免疫磁珠的制备方法及储存方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫磁珠制备领域，具体来说是一种分选白细胞的免疫磁珠的制备方法及储存方法。

背景技术

免疫磁珠(immunomagnetic beads,IMB)技术是近年来国内外研究的一种新的免疫学技术,IMB是免疫微球的一种，为包被有单克隆抗体的球形磁性微粒，可特异性地与靶物质结合使之具有磁响应性。该技术由John Ugelstar等于1979年首先制备出，从此被广泛的应用于医学卫生、科研等领域的许多方面，并由此引发了生物分离技术上的一次革命。

由于磁性微粒直径介于纳米级别，故又被称为磁性纳米粒子,近年来，人们将纳米磁珠表面包被抗体后，可以与特异性的抗原(如细菌、病毒、细胞、酶等)结合，利用磁性粒子所具有的磁响应性，在外加磁场作用下结合磁珠的靶物质就会被磁场吸附，从而与其他成分分离，达到纯化、富集或消除靶物质的作用。

磁性纳米颗粒的应用对材料的制备及表面性质要求较高,在人们所熟知的大量磁性材料中，可以做磁性材料的仅有少数几种：主要为金属氧化物Fe₂O₃、Fe₃O₄、MeFe₂O₄(Me＝Co、Mn、Ni)、化合物钕铁硼、钐钴等，它们的饱和磁化强度依次递增，但稳定性(抗氧化能力)依次递减,由于稳定性问题，人们在选择一些高饱和磁化强度的磁性微粒时，通常采纳工艺条件工艺条件十分苛刻的路线，这在一定程度上限制了这些饱和强度高但稳定性低的材料的应用,考虑到材料对人体的毒副作用及来源等方面，目前研究较多的为前两种材料。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是为了克服现有技术中的稳定性差、特异性不好的缺陷，而提供一种分选白细胞的免疫磁珠的制备方法及储存方法。

本发明解决上述技术问题提供的技术方案是：本发明公开了一种分选白细胞的免疫磁珠的制备方法，具体步骤如下：

一、合成油酸-Fe₃O₄

(1.1)、在通氮气的条件下，将FeCl₂·4H₂O、FeCl₃·6H₂O溶解于800ml蒸馏水中，加热回流，加热至90℃时，在机械搅拌的同时，把346ml NaOH溶液加入以上溶液中；

(1.2)、加入20ml油酸，90℃条件下，搅拌1小时后停止反应；

(1.3)、待溶液冷却至室温后,外加磁场吸附出沉淀，然后用蒸馏水清洗1-7次，产物即为油酸-Fe₃O₄；

二、Fe₃O₄/PVAc磁性微球制备

(2.1)、向安装有搅拌器、冷凝管、温度计及导气管的四口烧瓶中加入100ml水，水浴加热回流，通入氮气脱气20min；

(2.2)、加入表面活性剂和助表面活性剂，搅拌使充分混匀；

(2.3)、加入10ml含有0.4g油酸-Fe₃O₄纳米颗粒的醋酸乙烯酯混合溶液，搅拌使充分混匀；

(2.4)、温度均匀上升，在45-60℃的范围内停留30-120min，当反应体系温度升高到80℃，加入过氧化苯甲酰0.5g，恒温反应8h，随着反应的进行，液体颜色有黑色变为红棕色；

(2.5)、反应结束后，利用外加磁场将产物从溶液中分离出来，即将Fe₃O₄/PVAc从溶液中分离出来，用无水乙醇溶液清洗3次，并且分散在200ml无水乙醇溶液中；

三、(Fe₃O₄/PVA)/SiO₂磁性微球的制备

(3.1)、将以上所得颗粒分散在200ml乙醇和水混合液中，将以上混合溶液超声10min，使其均匀分散；

(3.2)、根据选择生成的SiO₂壳的厚度，向溶液中加入正硅酸乙酯，然后搅拌30min；

(3.3)、加入7ml NaOH溶液，室温下搅拌3h，最后利用外加磁场将终产物分离，再用乙醇清洗三次后，再分散在无水乙醇中；

四、磁性颗粒的氨基化修饰