[发明专利]一种酶固定化方法及其应用

权利要求书

1.一种酶固定化方法，其特征在于，利用磁感应蛋白与酶的直接融合，然后通过纳米铁珠对融合蛋白的吸附，从而实现酶的一步纯化与固定化，所述酶固定化方法包括以下步骤：

1）向载体质粒pET-28a(+)中插入磁感应蛋白基因，构建一通用载体；

2）将酶基因可操作地插入所述步骤1）中的通用载体中，构建含有酶基因的重组表达质粒，实现磁感应蛋白与酶的直接融合，再将该重组表达质粒导入宿主细胞，获得重组菌株；以及

培养所述重组菌株，诱导所述酶基因表达，收集细胞并用纯水洗涤，将收集的细胞重悬于TBS缓冲液中，并超声破碎，将细胞裂解液离心，向收集的上清中加入纳米铁珠，室温孵育，通过离心收集所得沉淀，并用TBS缓冲液洗涤以除去非吸附杂蛋白，从而获得一种固定化酶；

其中，所述酶是一种脂肪酶，所述磁感应蛋白基因是一种来自哺乳动物家鸽的磁感应蛋白基因，所述来自哺乳动物家鸽的磁感应蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的酶固定化方法，其特征在于，固定化脂肪酶在重复利用15次后，其相对活性仍然高达80%。

3.根据权利要求2所述的酶固定化方法，其特征在于，固定化脂肪酶在重复利用20次后，其相对活性仍然高达75%。

4.一种根据权利要求1-3中任意一项所述的酶固定化方法在制备工业酶制剂中的应用。