[发明专利]Taqman-MGB探针检测绵羊BMPR-IB基因A746G突变的试剂盒和方法

说明书

本发明属于生物技术领域，特别涉及Taqman‑MGB探针检测绵羊BMPR‑IB基因A746G突变的试剂盒和方法。公开的试剂盒，主要包括3管阳性对照样品、DNA提取液Ⅰ、DNA提取液Ⅱ、2×LightCycler 480 probes master反应缓冲液、引物BMF和BMR、探针BPA和BPG、ddH₂O。公开检测的方法，包括基因组DNA快速提取，利用引物对基因组DNA进行实时荧光定量PCR扩增，基因型判读。该试剂盒及检测方法操作简单、检测速度快、准确性高，而且不需要进行PCR产物后续分析即可判型，反应全过程在封闭的管内进行，减少了交叉污染。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及Taqman-MGB探针检测绵羊BMPR-IB基因A746G突变试剂盒和方法。

背景技术

高繁殖力是世界绵羊生产共同追求的重要目标之一。但由于绵羊绝大多数产单羔，少数产双羔，故极大地影响了绵羊的繁殖性能，随着集约化养羊业的不断发展，如何提高绵羊繁殖力是养羊业获得较好经济效益的关键。多胎性状是绵羊重要的繁殖性状之一，也是绵羊多产、高产的基础，繁殖力的高低直接影响生产成本，进而影响经济效益，因此，绵羊的多胎性能引起人们的普遍关注，国内外纷纷引进或培育多胎绵羊品种。研究表明，大部分绵羊品种产羔数低，多羔的遗传力较低，仅为0.12，在一定程度上限制了我国绵羊生产性能的提高，同时，繁殖性状与生长速度呈负相关关系，因而影响了常规育种方法的效果和可操作性，选育周期长。分子标记辅助选择可以弥补常规表型选择方法的不足，提高选择的准确性并缩短世代间隔，提高育种效率。

自从1980年以来，研究人员开始筛选、鉴定控制绵羊排卵率和产羔率的主效基因，研究证实绵羊FecB基因实际为骨形态发生蛋白IB型受体（BMPR-IB）基因，BMPR-IB基因的突变能够显著增加绵羊排卵率，是中国美利奴羊、小尾寒羊、湖羊等绵羊排卵率和产羔数的主效基因。我们前期研究表明，中国美利奴羊（军垦型）BMPR-IB基因存在A746G碱基突变，该基因编码区746处的A→G突变的发生与FecB表型一致，在绵羊群体中存在3种基因型，其遗传效应表现为：BB纯合型与地方品种羊相比，平均排卵数增加3枚，每只母羊平均每胎能多产1.5只羔羊；B+杂合型与地方品种羊相比，平均排卵数增加1.5枚，每只母羊平均每胎能多产1.0只羔羊；++野生型产羔数与地方品种接近。BMPR-IB基因B等位基因在绵羊群体中存在，使得羊群的繁殖率比较高，该基因A746G碱基突变对绵羊排卵率呈加性效应，对窝产羔数呈部分显性效应。因此，BMPR-IB基因可用于多胎绵羊的分子育种。

通过对母羊BMPR-IB基因A746G碱基突变的检测，开展BMPR-IB基因标记辅助选择，组建BB基因型绵羊群体，是快速提高绵羊繁殖力的一个有效方法，能够使群体平均产羔数达到230%以上，极大的增加羔羊数量，提高养羊的经济效益。而建立BMPR-IB基因A746G碱基突变的检测方法是实现分子标记辅助选择的前提条件。目前，针对BMPR-IB基因A746G突变的检测方法主要有：测序法、聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性技术（PCR-RFLP）、聚合酶链式反应-单链构象多态性（PCR-SSCP）、基因芯片法、荧光定量PCR方法（qPCR）。