[发明专利]同时测定养殖用水中孔雀石绿和结晶紫残留量的方法

说明书

技术领域

本发明属于环境质量安全检测技术领域，是一种用高效液相色谱-串联质谱法同时检测养殖用水中孔雀石绿和结晶紫残留量的方法。

背景技术

孔雀石绿又名碱性绿、严基块绿、孔雀绿，是一种带有金属光泽的绿色结晶体，工业上常用做染料；结晶紫作为染色剂在细胞学、组织学和细菌学等方面应用极广。在水产养殖中，渔民经常用孔雀石绿和结晶紫进行水体的消毒，杀灭寄生虫、预防鱼的水霉病、鳃霉病、小瓜虫病等。在鱼类的运输过程以及市场、饭店水箱中暂养销售时也有人将它们用作消毒剂，以延长鱼类的存活时间。孔雀石绿和结晶紫是小分子物质，进入机体后代谢还原成脂溶性的衍生物—隐色孔雀石绿和隐色结晶紫，在组织中长时间残留，其化学官能团三苯甲烷具有致癌、致畸、致突变等毒副作用，对动物的免疫系统和繁殖系统有着较大的影响。我国农业行业标准《无公害食品渔用药物使用准则》(NY5071-2002)将孔雀石绿列为禁用药物，在所有动物性食品中禁用。美国、韩国、日本、英国等许多国家已禁止将结晶紫用于水产养殖业。但是由于孔雀石绿和结晶紫价格低廉、疗效好，相关替代药品尚未发现，在水产养殖业中违规使用屡有发生，水产品中检出孔雀石绿和结晶紫的报道屡见报端，这对人们的身体健康、水产品的出口贸易和养殖对象赖以生存的水体环境等，都产生了不良的影响。

目前，有关孔雀石绿、结晶紫的检测方法主要是针对水产品等动物源性食品，用于对水产品质量安全的监督。而有关水体中孔雀石绿、结晶紫检测方法的报道相对较少。对动物源性食品的检测，总体上存在着前处理过程复杂、耗时长、检测结果具有滞后性的特点，这一点在水产品市场的抽样检测中尤为突出，常常是检测工作历时一周结果出来了，市场上相应的水产品已经被消费者食用了。孔雀石绿和结晶紫作为禁用渔药，迫切需要开发灵敏可靠的检测方法来监控其违规使用情况，这不仅局限于水产品本身，从养殖对象赖以生存的水体环境着手进行水体中孔雀石绿和结晶紫的监控显得极为必要。通过对水中孔雀石绿和结晶紫的检测，一方面可以从水产养殖源头上监控其使用情况，进一步完善无公害水质的检测指标，另一方面可以检测出在哪一具体环节有违规添加，有利于相关部门的监督,为水产品的质量安全提供技术保证。

目前，检测孔雀石绿、结晶紫及其代谢物残留量的常用方法有液相色谱法、液质联用法等。因为孔雀石绿和结晶紫的代谢产物隐色孔雀石绿和隐色结晶紫为脂溶性的，在水中溶解度极小，含量极低，多吸附于水底的沉积物中。因而本发明只对水中孔雀石绿和结晶紫的检测方法进行研发，不涉及隐色孔雀石绿和隐色结晶紫的检测方法。

高效液相色谱法通过保留时间定性、外标法定量，存在定性不准确回收率较低的弊端。水中孔雀石绿和结晶紫的残留通常很低，为ng/L级别，需要灵敏度高、定性可靠、定量准确的方法，本发明采用的液质联用内标法可以达到上述要求。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供了一种同时测定养殖用水中孔雀石绿和结晶紫的方法。

为了达到上述目的，本发明提供一种同时测定养殖用水中孔雀石绿和结晶紫残留量的方法，以目标化合物对应的同位素为内标，水样经过滤、液液萃取浓缩后、经中性氧化铝小柱净化、浓缩后，用乙腈-5mmol/L乙酸铵溶液(V:V,1:1)1mL定容，涡旋振荡过滤后用液质联用仪检测。

本方法孔雀石绿和结晶紫的检出限均为1ng/L，定量限均为2ng/L。孔雀石绿和结晶紫在2ng/L～20ng/L添加浓度范围内时，回收率为70％～120％，本方法的批内相对标准偏差≤10％，批间相对标准偏差≤15％。

优选方式下，上述同时测定养殖用水中孔雀石绿和结晶紫残留量的方法，具体步骤为：

(1)将待测养殖水样经孔径为0.45μm的水系纤维滤膜过滤，除去固体杂质和色素，备用；