[发明专利]干细胞外泌体的分离方法

权利要求书

1.一种干细胞外泌体的分离方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1：采用含血清培养基培养干细胞至细胞密度大于70％，收集干细胞，然后采用不含血清培养基对所述干细胞继续培养；

S2：除去所述S1得到的培养体系中的干细胞，然后将剩余组分过滤，收集滤液；

S3：将所述滤液加入第一浓缩管，离心，得到浓缩液；所述第一浓缩管为15mL10KD浓缩管；所述离心条件为：4℃，3500～4500g离心35～45min；

S4：将所述浓缩液分装于第二浓缩管，离心；然后在所述第二浓缩管中加入缓冲液，再次离心；所述第二浓缩管为0.5mL10KD浓缩管；所述离心和所述再次离心的条件均为：常温，15000g离心8～12min；

S5：将所述再次离心后的第二浓缩管的内管倒置于收集管中，离心，所述收集管中的液体为含高浓度干细胞外泌体的溶液；其中，所述离心条件为：常温，900～1100g离心1.5～2.5min。

2.根据权利要求1所述的干细胞外泌体的分离方法，其特征在于：

所述S1中，所述含血清培养基为含有质量分数为10％的胎牛血清的DMEM培养基；所述不含血清培养基为DMEM培养基；所述继续培养的时间为23～25h。

3.根据权利要求1所述的干细胞外泌体的分离方法，其特征在于：

所述S2中，所述过滤为采用0.22μm过滤膜过滤。

4.根据权利要求1所述的干细胞外泌体的分离方法，其特征在于：

所述S4中，所述缓冲液包括：0.01M PBS缓冲液；其中，所述PBS缓冲液的pH值为7.2～7.4。

5.根据权利要求4所述的干细胞外泌体的分离方法，其特征在于：

所述S4中，所述缓冲液还包括：0.05MTris-HCl缓冲液；所述PBS缓冲液和所述Tris-HCl缓冲液的体积比为(0.4～0.6):1；其中，所述Tris-HCl缓冲液的pH值为7.2～7.4。

6.根据权利要求1所述的干细胞外泌体的分离方法，其特征在于：

所述S1中，在所述继续培养之前还包括对收集的干细胞进行多次洗涤的步骤；

其中，所述洗涤液包括：0.01M PBS缓冲液，所述PBS缓冲液的pH值为7.2～7.4；所述多次为2～4次。

7.根据权利要求6所述的干细胞外泌体的分离方法，其特征在于：

所述S1中，在每升所述洗涤液中，还包括：5～10g EDTA-Na₂、0.5～0.8g聚乙二醇和5～6g乳糖酸。

8.根据权利要求7所述的干细胞外泌体的分离方法，其特征在于：

所述S1中，所述聚乙二醇的数均分子量为7500～8500。