[发明专利]细胞冻存液及细胞冻存方法

说明书

本发明属于细胞冻存领域，尤其涉及细胞冻存液及细胞冻存方法。本发明提供了一种细胞冻存液，包括基础培养基、血小板裂解物、bFGF和L‑谷氨酰胺，该细胞冻存液不含动物血清和不含DMSO，消除动物血清可能引入外源性病毒的可能性和消除DMSO对脂肪干细胞的不良影响；而且，本发明还提供了细胞冻存方法，该方法无需复杂的程序性降温，操作简单。采用本发明公开的细胞培养基和本发明公开的冻存法冻存脂肪干细胞一年后，细胞存活率能达到93％，且不影响脂肪干细胞分化能力。

技术领域

本发明属于细胞冻存领域，尤其涉及细胞冻存液及细胞冻存方法。

背景技术

脂肪干细胞即脂肪来源间充质干细胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)，是近年来从脂肪组织中分离得到的一种尚不成熟的具有自我复制能力的多潜能细胞。在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞，具有再生各种组织器官的潜在功能。

脂肪干细胞在无菌条件下从人体自身组织中取出，经分离、纯化后在模拟的体内生理条件下，通过核心的优化技术将其在体外进行培养，使未完全分化的细胞不断地分化生长,大量增殖，并使细胞保持良好的生长状态，以及旺盛的增殖活力，然后注射回自身，从而提高人体整个器官功能，改善机能老化状态，满足各种治疗需要。因此，脂肪干细胞目前已广泛地应用于衰老医学和再生组织工程。

但是，脂肪干细胞分离培养的周期比较长，多次传代后容易分化或失去多向分化的潜能。而科研研究以及临床应用中对脂肪干细胞的需求非常强烈，需要随时提供大批量的脂肪干细胞，因此，有必要将生产好的脂肪干细胞进行冷冻保存，待到有使用需求时再复苏使用。然而，目前常见的脂肪干细胞冻存液往往含有动物血清和DMSO。动物血清容易给细胞引入外源性病毒，给脂肪干细胞的临床应用带来潜在风险。DMSO对脂肪干细胞具有毒性，容易对细胞造成损伤。而且传统的细胞冻存过程需要程序降温，操作繁琐。

因此，寻找一种无毒、冻存效果好的细胞冻存液和操作简单的冻存方法是本领域技术人员亟待解决的技术问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了细胞冻存液及细胞冻存方法能有效解决现有技术的冻存液冻存效果差和现有冻存方法操作繁琐的技术缺陷。

本发明提供了一种细胞冻存液，包括基础培养基、血小板裂解物、bFGF和L-谷氨酰胺。

作为优选，所述血小板裂解物在所述细胞冻存液的体积百分比为5％。

作为优选，所述bFGF在所述细胞冻存液的浓度为50ng/ml。

作为优选，所述L-谷氨酰胺在所述细胞冻存液的浓度为4mmol/L。

其中，所述细胞冻存液包括基础培养基、血小板裂解物、bFGF和L-谷氨酰胺；所述血小板裂解物在所述细胞冻存液的体积百分比为5％；所述bFGF在所述细胞冻存液的浓度为50ng/ml；所述L-谷氨酰胺在所述细胞冻存液的浓度为4mmol/L。

作为优选，所述细胞冻存液还包括羟乙基淀粉、海藻糖、羧甲基纤维素钠和甘油中的至少一种。

作为优选，所述羟乙基淀粉在所述细胞冻存液体积百分比为0％～5％；所述海藻糖在所述细胞冻存液体积百分比为0％～5％；所述羧甲基纤维素钠在所述细胞冻存液体积百分比为0％～0.1％；所述甘油在所述细胞冻存液体积百分比为0％～20％。