[发明专利]虾夷扇贝中微囊藻毒素检测方法

权利要求书

1.虾夷扇贝中微囊藻毒素检测方法，其特征是包括如下步骤：

1)、虾夷扇贝样品前处理：

①、取1g待测虾夷扇贝肉进行匀浆；

②、在浆液中加入10～20mL甲醇后于80±5℃超声提取20～30min；

③、将超声提取所得物离心，取出上层清液；

④、以离心所得的沉淀替代步骤②中的浆液重复上述步骤②～步骤③的超声提取和离心；

⑤、将所有的上层清液合并后用氮气吹干，然后用5～10mL水复溶，得样品液；

2)、HLB/PDMS涂层搅拌棒的制备：

①、将搅拌棒清洗后烘干；

②、配制PDMS溶胶：

将100±5μL聚二甲基硅氧烷、100±5μL甲基三甲氧基硅烷、10±1μL聚甲基氢硅氧烷和100±5μL 95％三氟乙酸混合，得PDMS溶胶；

95％三氟乙酸为由95％三氟乙酸和5％水混合而得，％为体积％；

③将步骤①所得的烘干搅拌棒浸入步骤②所得的PDMS溶胶，取出后在搅拌棒的表面裹上HLB微粒，然后于60～80℃干燥24～30h，得HLB/PDMS涂层搅拌棒；

3)、搅拌棒吸附萃取：

先将HLB/PDMS涂层搅拌棒在甲醇中浸泡20～30min，然后置入5～10mL的步骤1)所得的样品液中，加酸调整pH值为3～7，以600～1000rpm富集60～120min；

然后取出HLB/PDMS涂层搅拌棒放入含有100±20μL乙腈的离心管中超声10～20min，使样品中的MCs解吸附，所得到的解吸附溶液用于液相色谱-质谱分析；

4)、液相色谱-质谱条件：

色谱柱：2.1mm×150mm、3.5μm的Waters XSelect HSS T3，流动相：A为含0.1％甲酸的乙腈溶液，B为含0.1％甲酸的水溶液；

梯度洗脱程序：0～1min，75％B；1～5min，75％～5％B；5～9min，5％B；9～10min，5％～75％B；10～16min，75％B；上述％均为体积％；

柱温40℃，流速0.30mL/min，进样量10μL；

离子源为电喷雾离子源，正源模式，离子源温度500℃，电喷雾电压5.5kV，雾化气(GS1)压力45psi，辅助气(GS2)压力65psi，气帘气(CUR)压力30psi，扫描方式为多反应监测(MRM)模式；7种微囊藻毒素的质谱参数见下表；

7种微囊藻毒素的质谱参数

从而获得步骤3)所得的解吸附溶液中7种微囊藻毒素的浓度，最终获得虾夷扇贝样品7种微囊藻毒素的浓度。

2.根据权利要求1所述的虾夷扇贝中微囊藻毒素检测方法，其特征在于：

所述步骤1)中，重复上述步骤②～步骤③的超声提取和离心的次数为1～3次。

3.根据权利要求1或2所述的虾夷扇贝中微囊藻毒素检测方法，其特征在于：

所述步骤1)中，超声为20KHz，130W，50％变幅。

4.根据权利要求1所述的虾夷扇贝中微囊藻毒素检测方法，其特征在于：

所述步骤2)的①为将搅拌棒依次浸入水、二氯甲烷、1mol/L NaOH和0.1mol/L HCl中清洗，再用水冲洗，之后放入80～100℃烘箱烘干2～3h。

5.根据权利要求1所述的虾夷扇贝中微囊藻毒素检测方法，其特征在于：

所述步骤2)的③中，重复上述浸入PDMS溶胶、取出后在搅拌棒的表面裹上HLB微粒，直至搅拌棒表面被HLB微粒完全包覆。

6.根据权利要求1所述的虾夷扇贝中微囊藻毒素检测方法，其特征在于：

步骤3)使用后的HLB/PDMS涂层搅拌棒超声清洗5～10min以便重复利用。