[发明专利]一种大黄鱼干扰素IFN1启动子、核酸构建体、细胞及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，特别是涉及一种大黄鱼干扰素IFN1启动子、核酸构建体、细胞及其制备方法和用途。

背景技术

干扰素(interferon,IFN)是一类重要的细胞因子，可通过与细胞膜上的相应受体结合启动细胞信号转导，具有多种生物学功能，如激活抗病毒基因参与机体抗病毒免疫、调节免疫应答、抗肿瘤等(Samuel CE.Antiviral actions of interferons[J].Clin Microbiol Rev,2001；14:778–809)。哺乳动物中的研究根据基因序列、功能特性和受体类型的不同将IFN分为三类：I型干扰素，主要由IFN-α和IFN-β组成，II型干扰素为IFN-γ，III型干扰素为IFN-λ(Pestka S,Krause CD,Walter MR.Interferons,interferon-like cytokines,and their receptors[J].Immunol Rev,2004；202:8–32)。其中，I型干扰素具有显著的抑制病毒复制的功能，并可诱导多种抗病毒基因的表达，包括蛋白激酶R(Protein Kinase R,PKR)、2′,5′-寡腺苷酸合成酶(2′,5′-Oligoadenylate synthetase,OAS)和Mx蛋白(Mx protein)，在机体的抗病毒免疫反应中发挥重要作用。鉴于I型干扰素在宿主抗病免疫反应中的重要性，研究其转录调控机制对于揭示机体的免疫反应及细胞信号转导通路具有重要意义。哺乳动物中的相关研究已开发出人IFN-β启动子荧光素酶报告基因系统，研究目标基因的功能及其介导的相关信号通路(Sabbah A,Chang TH,Harnack R,et al.Activation of innate immune antiviral responses by Nod2[J].Nat Immunol,2009；10:1073–80)。

目前，I型干扰素已在多种硬骨鱼类中得到克隆，包括斑马鱼(Danio rerio)、斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)、大西洋鲑(Salmo salar)和虹鳟(Oncorhynchus mykiss)等。与哺乳动物中干扰素的命名规则不同的是，硬骨鱼类I型干扰素是根据其基因组中的位置，按照阿拉伯数字顺序来命名(Robertsen B,Bergan V, T,et al.Atlantic salmon interferon genes:cloning,sequence analysis,expression,and biological activity[J].J Interferon Cytokine Res,2003；23:601–12)。此外，在斑马鱼中的研究中已经克隆了I型干扰素的启动子序列，构建了荧光素酶报告基因质粒，并成功用于免疫相关基因功能的研究(Sun F,Zhang YB,Liu TK,et al.Fish MITA serves as a mediator for distinct fish IFN gene activation dependent on IRF3or IRF7[J].J Immunol,2011；187:2531–9)。

大黄鱼是我国重要的海水经济鱼类，对其抗病免疫基础的研究不仅可以丰富鱼类免疫学的认识，并可为疾病防控与抗病分子模块育种奠定基础，因而获得广泛关注。目前对鱼类干扰素IFN1基因的表达调控机制，尤其是有关干扰素IFN1所涉及的细胞信号转导通路调控网络的相关研究依然较匮乏。

发明内容

本发明的目的在于提供一种大黄鱼干扰素IFN1启动子。

为实现上述目的，本发明提供一种大黄鱼干扰素IFN1启动子，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，或者为与SEQ ID NO：1互补的核苷酸序列。

本发明提供一种核酸构建体，包含所述的IFN1启动子，与IFN1启动子可操作连接的基因序列，其中所述IFN1启动子与所述基因序列来源相同或者不同。

本发明提供一种载体，其特征在于：所述载体含有所述的IFN1启动子或所述的核酸构建体。

进一步，所述载体为所述的IFN1启动子或所述的核酸构建体与真核表达载体经重组得到的重组载体；优选的，真核表达载体为pGL4.17质粒。

本发明提供一种重组细胞，其特征在于：所述细胞含有所述的IFN1启动子或所述的核酸构建体或所述的载体，所述重组细胞为鱼类细胞或哺乳动物细胞；优选的，鱼类细胞为EPC细胞。