[发明专利]一种硫酸鱼精蛋白注射液的制备方法，该方法得到的硫酸鱼精蛋白注射液及应用

说明书

本申请涉及一种硫酸鱼精蛋白注射液的制备方法，至少包括以下步骤：将硫酸鱼精蛋白提取物溶解于水中得溶液，加酸调节溶液pH值为2.5‑3.5，然后进行除菌过滤得到除菌过滤液，最后进行灌封得到硫酸鱼精蛋白注射液。在除菌过程中硫酸鱼精蛋白几乎没有损失，且产物的效价和细菌内毒素测定满足药典规定，可直接用于临床。

技术领域

本申请涉及蛋白质精制技术领域，具体讲，涉及一种硫酸鱼精蛋白注射液的制备方法，该方法得到的硫酸鱼精蛋白注射液，以及该硫酸鱼精蛋白注射液的应用。

背景枝术

鱼精蛋白是从鱼类精子细胞中提取的一种多聚阳离子肽的硫酸盐。其具有强碱性基团，在体内可与强酸性的肝素结合，形成稳定的复合物，从而使肝素失去抗凝能力。由于该物质能与一些蛋白质、多肽结合，可用来与胰岛素、促皮质激素等形成络合物，以制备长效注射剂。

硫酸鱼精蛋白生产的主要包括提取、分离及精制三个步骤。其中，鱼精蛋白的提取一般是将成熟雄鱼的鱼白绞碎，加入稀醋酸溶液，分离出凝聚的精子核，然后采用有机溶剂沉淀，之后加入无机酸搅拌一定时间，弃去废渣，提取液采用有机溶剂沉淀，得到鱼精蛋白无机酸盐粗品。在分离步骤，最常用的方法就是有机溶剂和硫酸反复沉淀溶解，逐步去除不同的杂质。也有采用蛋白沉淀剂如钨酸、偏磷酸、磺基水杨酸等进行沉淀分离的。

现有技术最常用的蛋白质精制方法是采用色谱柱进行纯化，主要采用离子交换层析和肝素亲和层析。但是，上述方法只能对鱼精蛋白进行提纯，无法直接得到硫酸鱼精蛋白注射液。而且鱼精蛋白原料为带菌原料，目标产物为无菌水溶液，但该蛋白对热不耐受，不能对中间产物进行热灭菌。导致在生产硫酸鱼精蛋白注射液时，对生产过程的无菌控制要求极为苛刻，系国内药品生产环境要求中最高级别，因此需要简化该过程的无菌控制，且不影响提纯效果，通过提纯直接得到硫酸鱼精蛋白注射液。

鉴于此，特提出本申请。

发明内容

本申请的首要发明目的在于提出一种硫酸鱼精蛋白注射液的制备方法。

本申请的第二发明目的在于提出该方法得到的硫酸鱼精蛋白注射液。

本申请的第三发明目的在于提出该硫酸鱼精蛋白注射液的应用。

为了完成本申请的目的，采用的技术方案为：

本申请涉及一种硫酸鱼精蛋白注射液的制备方法，至少包括以下步骤：

(1)将硫酸鱼精蛋白提取物溶解于水中得溶液，加酸调节溶液pH值为2.5-3.5；

(2)对步骤(1)得到的溶液进行除菌过滤，得到除菌过滤液；

(3)对步骤(2)得到的除菌过滤液进行灌封，得到所述硫酸鱼精蛋白注射液。

优选地，步骤(1)中，将所述提取物溶解于水中，得到浓度为10-30g/L，优选为20g/L的溶液。

优选地，步骤(1)中，pH值调节完成后，向所述溶液中补水，稀释至浓度为5-15g/L，优选为10g/L，然后进行步骤(2)。

优选地，所述步骤(2)至少包括以下步骤：

(2a)第一次除菌过滤：采用孔径为0.22μm的除菌滤芯对所述溶液进行过滤，得到第一过滤液；

(2b)第二次除菌过滤：采用孔径为0.22μm的除菌滤芯对所述第一过滤液进行过滤，得到第二过滤液；

(2c)第三次除菌过滤：采用孔径为0.2μm的除菌滤芯对所述第二过滤液进行过滤，得到第三过滤液；

(2d)第四次除菌过滤：采用孔径为0.2μm的除菌滤芯对所述第三过滤液进行过滤，得到所述除菌过滤液。

优选地，步骤(2a)和(2b)中，所述过滤压力≤0.2mpa。