[发明专利]一种从牛血中提取SOD的方法

权利要求书

1.一种从牛血中提取SOD的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)预处理：取新鲜牛血，加入抗凝剂搅拌破碎，离心得红细胞；

(2)清洗：采用0.1～0.5％的生理盐水清洗红细胞，洗涤1～3次；

(3)溶血：洗涤后加入溶膜剂，调节温度并搅拌，再放入超声波中处理20～30s，得溶血液；

(4)加热：溶血液中添加氯化铜和氯化锌，搅拌均匀，离心后得到粗提液；

(5)一次离心：将粗提液加入0.3～0.4倍体积的氯仿-乙醇混合搅拌，离心弃沉淀，得到粗酶液；

(6)二次离心：向粗酶液中加入0.6～0.8倍体积的溶剂，离心取上清液；

(7)冷冻干燥：将上述上清液进行离心，得到沉淀加入缓冲液溶解，脱盐后冷冻干燥，即可得到高纯度的SOD。

2.如权利要求1所述从牛血中提取SOD的方法，其特征在于，所述抗凝剂为柠檬酸、肝素、EDTA、枸橼酸盐、草酸钾中任一种。

3.如权利要求1所述从牛血中提取SOD的方法，其特征在于，所述溶膜剂的加入量为溶血液体积的15～20％。

4.如权利要求1所述从牛血中提取SOD的方法，其特征在于，所述溶膜剂按体积计算为10～20％的甲苯、5～10％的四氯化碳、余量为蛋清的混合液。

5.如权利要求1所述从牛血中提取SOD的方法，其特征在于，所述步骤(3)中调节温度分为两个阶段，第一阶段控制温度为-10～-2℃，持续时间为8～10h，第二阶段控制温度为70～80℃，持续时间为6～8h。

6.如权利要求1所述从牛血中提取SOD的方法，其特征在于，所述氯化铜的用量为10.7～13.8mmol/L，氯化锌的用量为23.6～32.9mmol/L。

7.如权利要求1所述从牛血中提取SOD的方法，其特征在于，所述超声波的处理频率为20～30KHz。

8.如权利要求1所述从牛血中提取SOD的方法，其特征在于，所述溶剂为浓度75～80％的硫酸铵溶液。