[发明专利]一种诱导菌剂及应用其缓解反刍动物瘤胃酸中毒的方法

权利要求书

1.一种M. elsdenii LC1诱导菌剂，其特征在于，所述菌剂的制备过程为：在厌氧工作站进行种子培养后，所用种子培养基是以水为溶质，向其中加入质量比为1.0%胰蛋白胨，0.5%酵母提取物，0.5%牛肉提取物，0.5%葡萄糖，0.05%半胱氨酸盐酸盐，0.4% Na2HPO4，5.0%无菌脱纤维马血，0.002% D,L-乳酸，0.0005%刃天青，将配置的种子培养基液高温105到110℃灭菌除氧后密封冷却，调节pH为6.8到7.0；取出种子培养液，向高营养诱导培养基中直接接种种子培养液进行高营养富集诱导，所述高营养诱导培养基是以水为溶质，向其中加入质量比为0.1%胰蛋白胨，0.1%酵母提取物，0.06%半胱氨酸盐酸，0.09% K2HPO4，0.09% KH2PO4，0.18% NaCl，0.024% CaCl·2H2O，0.083% MgSO4·7H2O，0.18% (NH3)2SO4，3.0%胎牛血清，0.3%葡萄糖及0.36% D,L-乳酸，将配置的发酵产酸培养基液在105到110℃高温灭菌10分钟除氧后密封冷却，调节pH为 6.7到7.0；后接种至中营养诱导培养基进行中营养富集诱导，所述中营养诱导培养基是以水为溶质，向其中加入质量比为0.1%胰蛋白胨，0.1%酵母提取物，0.06%半胱氨酸盐酸，0.09% K2HPO4，0.09% KH2PO4，0.18% NaCl，0.024%CaCl·2H2O，0.083% MgSO4· 7H2O，0.18% (NH3)2SO4及0.18% D,L-乳酸；最后接种至低营养诱导培养基进行低营养富集诱导，所述低营养诱导培养基是以水为溶质，向其中加入质量比为0.1%胰蛋白胨，0.1%酵母提取物，0.06%半胱氨酸盐酸，0.09% K2HPO4，0.09%KH2PO4，0.18% NaCl，0.024% CaCl·2H2O，0.083% MgSO4· 7H2O，0.18% (NH3)2SO4及0.09% D,L-乳酸；得到M. elsdenii LC1诱导菌剂；诱导过程中诱导罐密闭且无需通入其他气体，以乳酸为发酵底物，进行底物不同乳酸浓度的梯度诱导，诱导全过程保持厌氧。

2.根据权利要求1所述的M. elsdenii LC1诱导菌剂，其特征在于，所述种子培养过程为：取出冻存的M. elsdenii LC1菌株种子细菌液，以1%的接种量接种种子培养基，36~39℃厌氧培养，所述培养时间为8到10小时，待到种子培养基浑浊度OD值为0.38~0.42时，取出种子培养液接种到新的种子培养基中继续培养，所述培养时间为8到10小时，再次待到培养液浑浊度OD值为0.38~0.42时，取出种子培养液进行高营养富集诱导。

3.根据权利要求1所述的M. elsdenii LC1诱导菌剂，其特征在于，所述高营养富集诱导是将种子培养液以0.3%到1%的量接种到高营养诱导培养基，诱导水浴温度控制为37℃到39℃，无需通入特殊气体，设置培养液搅拌速度为100到200rpm，诱导生长18到24小时后取菌液接种至一新高营养诱导培养基，如此往复3到4次后，取出诱导菌液进行中营养富集诱导。

4.根据权利要求1所述的M. elsdenii LC1诱导菌剂，其特征在于，所述中营养富集诱导是将高营养诱导菌液以0.5%到1%的量接种到中营养诱导培养基，诱导水浴温度控制为37℃到39℃，无需通入特殊气体，设置培养液搅拌速度为100到200rpm，诱导生长20到26小时后取菌液接种至一新中营养诱导培养基，如此往复3到4次后，取出诱导菌液进行低营养富集诱导。