[发明专利]一种纯化分离阿托西班的方法

权利要求书

1.一种纯化分离阿托西班的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1、将阿托西班粗品用乙腈水溶液溶解，滤膜过滤，得到粗品溶液待用；

步骤2、使用流动相A：磷酸二氢钠或磷酸二氢钾的水溶液平衡反相色谱柱；

步骤3、将步骤1的粗品溶液载入反相色谱柱；

步骤4、采用流动相A：磷酸二氢钠或磷酸二氢钾的水溶液、流动相B：乙腈进行梯度洗脱，并收集洗脱峰；

步骤5、将收集的纯度大于99.7％目的肽溶液于不超过35℃下进行减压旋蒸浓缩，得到浓缩液待用；

步骤6、将步骤5的浓缩液转成醋酸盐的肽溶液；

步骤7、将步骤6转成醋酸盐的肽溶液于不超过35℃下进行减压旋蒸浓缩，后进行冷冻干燥得到阿托西班成品。

2.根据权利要求1所述的纯化分离阿托西班的方法，其特征在于，步骤2和步骤4中流动相A中磷酸二氢钠或磷酸二氢钾的质量浓度为0.05wt％～6.0wt％，pH值为4.0-6.0。

3.根据权利要求1所述的纯化分离阿托西班的方法，其特征在于，步骤2和步骤4中流动相A中磷酸二氢钠或磷酸二氢钾的质量浓度为0.1wt％-1.0wt％，pH值为4.5-5.5。

4.根据权利要求1或2或3所述的纯化分离阿托西班的方法，其特征在于，步骤4按体积分数设置流动相梯度，0到60分钟A：B由85～65：15～35到45～25：55～75。

5.根据权利要求1或2或3所述的纯化分离阿托西班的方法，其特征在于，步骤1中阿托西班粗品纯度不低于55％，Asp⁵-阿托西班含量不高于2％，Gly⁹-OH-阿托西班含量不高于5％。

6.根据权利要求1或2或3所述的纯化分离阿托西班的方法，其特征在于，步骤1乙腈水溶液为20v/v％乙腈水溶液。

7.根据权利要求1或2或3所述的纯化分离阿托西班的方法，其特征在于，步骤1用孔径为0.45μm滤膜过滤。

8.根据权利要求1或2或3所述的纯化分离阿托西班的方法，其特征在于，反相色谱柱内的固定相为反相C18填料。

9.根据权利要求1或2或3所述的纯化分离阿托西班的方法，其特征在于，步骤6用0.1v/v～1v/v％醋酸水溶液平衡反相色谱柱后，将步骤5的浓缩液上样至反相色谱柱中，0.1v/v～1v/v％醋酸水溶液冲洗柱子3个柱体积；再用50％的乙腈和50％的0.1v/v～1v/v％醋酸水溶液洗脱，收集洗脱液即转成醋酸盐的肽溶液。

10.根据权利要求1或2或3所述的纯化分离阿托西班的方法，其特征在于，平衡、洗脱、冲洗反相色谱柱的流速根据反相色谱柱的规格进行设定，2*25cm反相色谱柱采用5～20ml/min的流速，其它规格的反相色谱柱流速线性放大。