[发明专利]一种纯化分离阿托西班的方法

说明书

技术领域

本发明涉及多肽药物制备技术领域，具体涉及一种纯化分离阿托西班的方法。

背景技术

阿托西班是一种合成的9肽，英文名为：Atosiban，为一种环状多肽，其序列如下：

c[Mpa-D-Tyr(Et)-Ile-Thr-Asn-Cys]-Pro-Orn-Gly-NH2

阿托西班是妇产科药物中的一种突破产品，它是一种催产素类似物，是子宫内基蜕膜、胎膜上受体的催产素竞争性拮抗剂，可以直接与催产素竞争催产素受体，抑制催产素和催产素受体结合，从而直接抑制催产素作用于子宫，抑制子宫收缩；也可以抑制磷脂酰肌醇的水解作用，阻断第二信使的生成以及Ca²⁺的活动，从而间接抑制子宫对催产素的反应，使子宫收缩得到抑制，达到保胎的目的。在中国，年出生率约2000万，按目前临床统计数据，约10-15％的孕妇需要进行保胎治疗，按10％计算，病人数量约为200万。

Gly⁹-OH-阿托西班和Asp⁵-阿托西班均有较大的毒性，且在阿托西班合成过程中，上述2种杂质的比例较高。

Gly⁹-OH-阿托西班序列如下

c[Mpa-D-Tyr(Et)-Ile-Thr-Asn-Cys]-Pro-Orn-Gly-OH

Asp⁵-阿托西班序列如下：

c[Mpa-D-Tyr(Et)-Ile-Thr-Asp-Cys]-Pro-Orn-Gly-NH2

现有技术中，专利CN103421092采用阳离子交换方法对Gly⁹-OH-阿托西班杂质进行分离。对Asp⁵-阿托西班杂质的分离尚未有报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种纯化分离阿托西班的方法，以解决现有技术的不足。

本发明采用以下技术方案：

一种纯化分离阿托西班的方法，包括如下步骤：

步骤1、将阿托西班粗品用乙腈水溶液溶解，滤膜过滤，得到粗品溶液待用；

步骤2、使用流动相A：磷酸二氢钠或磷酸二氢钾的水溶液平衡反相色谱柱；

步骤3、将步骤1的粗品溶液载入反相色谱柱；

步骤4、采用流动相A：磷酸二氢钠或磷酸二氢钾的水溶液、流动相B：乙腈进行梯度洗脱，并收集洗脱峰；

步骤5、将收集的纯度大于99.7％目的肽溶液于不超过35℃下进行减压旋蒸浓缩，得到浓缩液待用；

步骤6、将步骤5的浓缩液转成醋酸盐的肽溶液；

步骤7、将步骤6转成醋酸盐的肽溶液于不超过35℃下进行减压旋蒸浓缩，后进行冷冻干燥得到阿托西班成品。

进一步地，步骤2和步骤4中流动相A中磷酸二氢钠或磷酸二氢钾的质量浓度为0.05wt％～6.0wt％，pH值为4.0-6.0。

进一步地，步骤2和步骤4中流动相A中磷酸二氢钠或磷酸二氢钾的质量浓度为0.1wt％-1.0wt％，pH值为4.5-5.5。

进一步地，步骤4按体积分数设置流动相梯度，0到60分钟A：B由85～65：15～35到45～25：55～75。

进一步地，步骤1中阿托西班粗品纯度不低于55％，Asp⁵-阿托西班含量不高于2％，Gly⁹-OH-阿托西班含量不高于5％。

进一步地，步骤1乙腈水溶液为20v/v％乙腈水溶液。

进一步地，步骤1用孔径为0.45μm滤膜过滤。

进一步地，反相色谱柱内的固定相为反相C18填料。

进一步地，步骤6用0.1v/v～1v/v％醋酸水溶液平衡反相色谱柱后，将步骤5的浓缩液上样至反相色谱柱中，0.1v/v～1v/v％醋酸水溶液冲洗柱子3个柱体积；再用50％的乙腈和50％的0.1v/v～1v/v％醋酸水溶液洗脱，收集洗脱液即转成醋酸盐的肽溶液。

进一步地，平衡、洗脱、冲洗反相色谱柱的流速根据反相色谱柱的规格进行设定，2*25cm反相色谱柱采用5～20ml/min的流速，其它规格的反相色谱柱流速线性放大。

本发明的有益效果：