[发明专利]一种植物细胞原生质体纯化仪及纯化方法

说明书

技术领域

本发明属于植物细胞原生质体分离纯化技术领域，具体涉及一种植物细胞原生质体纯化仪及纯化方法。

背景技术

植物细胞原生质体是指将植物细胞壁去除后的原生质团，在适宜的渗透液中保持球型的细胞。目前原生质体在植物细胞工程中占据很重要的位置，不但是植物细胞杂交的良好亲本，还是植物遗传工程的理想受体是细胞生物学研究的重要材料。植物细胞原生质体分离是达到这些目的的重要技术基础。

传统的原生质体纯化方法有自然沉降法、密度梯度离心法。自然沉降法将过滤和沉降相结合，酶解液滤网过滤后置于试管内，组织碎片、未去壁细胞、原生质体和叶绿体等细胞器在重力作用下下降速度不同，根据经验吸取原生质体较多的悬浮液以获得原生质的纯化；离心漂浮法是将酶解液置于离心管内，再将高渗溶液加至离心管底部(如25％蔗糖溶液)，在酶解液和高渗溶液之间形成一个界面，再通过一定速度的水平离心，组织碎片、未完全去壁的细胞破碎的细胞体沉于离心管底部，完好的原生质体集中在高渗上层和酶解液之间的界面上，细胞器如叶绿体则仍留在酶解液中，小心吸取原生质体液层以获得纯化。

然而传统的自然沉降法、密度梯度离心法等繁琐，损坏严重，得率低，且通过密度梯度离心的对原生质体的破坏较大，得率低。有必要开发一种步骤简化、得率高的原生质体纯化装置。

发明内容

本发明提供的一种植物细胞原生质体纯化仪及纯化方法，解决了传统的自然沉降法、密度梯度离心法等繁琐，损坏严重，得率低，且通过密度梯度离心的对原生质体的破坏较大，得率低的问题。

本发明的目的是提供一种植物细胞原生质体纯化仪及纯化方法，包括电泳池，所述电泳池内从上到下依次划分为加样室、滴漏室和电泳室，所述滴漏室为漏斗形状，所述加样室与所述滴漏室连通、并且所述滴漏室上端与所述加样室通过滤膜隔开，所述电泳室的左侧设置有负电极，右侧设置有正电极，所述电泳室的底部从左至右分别连通有细胞碎片收集盘、原生质体收集盘和叶绿体收集盘，所述细胞碎片收集盘位于所述滴漏室的下方，所述叶绿体收集盘靠近所述正电极设置，所述电泳室内还纵向设置有滤网，所述滤网位于原生质体收集盘的右侧壁上方。

优选的，所述的植物细胞原生质体纯化仪中，所述滤膜的孔径φ为50-100微米。

优选的，所述的植物细胞原生质体纯化仪中，所述滤膜搁置在滴漏室上端端口处。

优选的，所述的植物细胞原生质体纯化仪中，所述滤网的孔径φ为10微米。

优选的，所述的植物细胞原生质体纯化仪中，所述电泳室的上端靠近所述正电极处开设有滤网插孔，并且电泳室的两个相对的侧壁上分别开设有滤网滑槽，所述滤网的宽度小于所述滤网插孔的长度，所述滤网的厚度小于所述滤网插孔的宽度，并且所述滤网的两侧与两个滤网滑槽一一对应滑动连接。

优选的，所述的植物细胞原生质体纯化仪中，所述电泳池的外部还设置有直流电泳仪，并且所述直流电泳仪的负极与所述负电极电连接，正极与所述正电极电连接。

优选的，所述的植物细胞原生质体纯化仪中，所述细胞碎片收集盘、所述原生质体收集盘和所述叶绿体收集盘均可拆卸的连接在所述电泳室的底部，具体结构为：所述电泳室的底部从左至右分别连通有细胞碎片流通管、原生质体收流通管和叶绿体流通管，所述细胞碎片收集盘的开口端与所述细胞碎片流通管底部螺接，所述原生质体收集盘的开口端与所述原生质体收流通管底部螺接，所述叶绿体收集盘的开口端与所述叶绿体流通管底部螺接。

优选的，所述的植物细胞原生质体纯化仪中，所述细胞碎片收集盘与所述细胞碎片流通管之间、所述原生质体收集盘与所述原生质体收流通管之间，所述叶绿体收集盘与所述叶绿体流通管之间均设置有密封圈。

本发明还提供了一种所述的植物细胞原生质体纯化仪的纯化方法，包括以下步骤：

S1，电泳室(3)内装满0.5mol/L的甘露醇缓冲液，将直流电泳仪(7)的电场强度调节在1.5-5v/cm，进行电泳；

S2，电泳开始后，将制备好的原生质体混合物悬浮液按照6-12滴/分钟的速度滴加入加样室(1)内直至滴加完毕，然后继续电泳30min；

S3，关闭电源，收集原生质体收集盘(5)内的原生质体。

与现有技术相比，本实用发明提供的一种植物细胞原生质体纯化仪及纯化方法，具有以下有益效果：