[发明专利]一种辅助诊断脑卒中的检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种辅助诊断脑卒中的检测试剂盒，其特征是：所述的检测试剂盒包含一对二氢叶酸还原酶基因启动子区甲基化特异性扩增引物，所述的一对二氢叶酸还原酶基因启动子区甲基化特异性扩增引物包括甲基化特异性上游引物和甲基化特异性下游引物：

所述的甲基化特异性上游引物包括以下核苷酸序列：

5’- TATTTGAGCGGTGGTTAG -3’；

所述的甲基化特异性下游引物包括以下核苷酸序列：

5’- TCTACTATAACGAACGAACTC -3’。

2.根据权利要求1所述的一种辅助诊断脑卒中的检测试剂盒的检测方法：其特征是：包括以下步骤：

步骤一、提取样本的全血基因组DNA，并检测所得DNA的浓度；

步骤二、采用甲基化试剂盒对样本DNA进行亚硫酸氢盐转化；

步骤三、荧光定量实时特异性PCR前期准备：在引物含量为10uM 条件下， 分别加入 Primer TE 或 dd H2O 进行稀释；

步骤四、进行荧光定量实时特异性PCR：取步骤二中转化过的DNA样本20ng加入到Zymo TaqTM PreMix酶，并加入一对二氢叶酸还原酶启动子区甲基化特异性扩增引物，进行PCR扩增；

步骤五、对结果进行甲基化程度分析。

3.根据权利要求2所述的一种辅助诊断脑卒中的检测试剂盒的检测方法：所述的步骤一中采用Lab-Aid 820全自动核酸提取仪提取全血基因组DNA，再通过NanoDrop2000超微量分光光度计检测DNA的浓度。

4.根据权利要求2所述的一种辅助诊断脑卒中的检测试剂盒的检测方法：所述的步骤二中采用EZ DNA Methylation-Gold 试剂盒对样本DNA进行亚硫酸氢盐转化。

5.根据权利要求2所述的一种辅助诊断脑卒中的检测试剂盒的检测方法：所述的步骤四中PCR扩增条件为：首先95℃ 10min的预变性；接着95℃ 20s，Tm 20s，72℃ 30s，共45个循环的退火反应；然后延伸反应40℃ 10min。