[发明专利]一种海水微藻常温液态保存配方和制作方法

权利要求书

1.一种海水微藻常温液态保存配方，其特征是，该配方包含以下成分：1）细胞数量≥10²⁰CFU/ml的藻类浓缩液50-80%；2）藻类营养液10-30%；3）均质剂：0.1-0.25%。

2.根据权利要求1所述的一种海水微藻常温液态保存配方，其特征是，海水微藻用柠檬酸或乳酸调节pH=4.5-4.8,并添加NaCl（1.5g/L）和MgCl₂（0.075g/L）。

3.根据权利要求1所述的一种海水微藻常温液态保存配方，其特征是，所用均质剂是琼脂粉、右旋糖苷、海藻酸钠混合物，比例为：12:5:1。

4.根据权利要求1所述的一种海水微藻常温液态保存配方，其特征是，藻类营养液成分：NH₄NO₃=50-100mg ；K₂HPO₄=5mg ；FeC₆H₅O₇=0.1-0.5mg；海水=1000ml。

5.根据权利要求1-5所述的一种海水微藻常温液态保存配方和制作方法，其特征是：本发明技术方案通过扩增培养，在无菌条件下培养到指定细胞浓度，无菌灌装，避免有害细菌等滋生污染产品。

6.可以通过以下具体步骤得到进一步实现：a藻类的培养：将纯培养的藻种进行一级、二级扩种培养藻种的一级培养：在超净工作台下，将保种的纯培养的藻种接种到1L三角瓶中（装有600ml藻类生长培养基），置于光照培养箱内，调节温度25℃，光照强度5000Lx，每天摇瓶6次，当藻种浓度超过10⁶CFU/ml时得到一级藻类培养液。

7.根据权利要求1-5所述的一种海水微藻常温液态保存配方和制作方法，其特征是：藻类二级培养：在无菌操作下，将一级培养藻种按照1:3比例接种到10L广口瓶中，调节温度25℃，光照强度5000Lx，每天摇瓶6次，当藻种浓度超过10⁶CFU/ml时得到二级藻类培养液。

8.根据权利要求1-5所述的一种海水微藻常温液态保存配方和制作方法，其特征是：大量培养：a无菌接种到100L的塑料桶中，调节温度25℃，光照强度5000Lx，进行充气培养，期间可补充培养液，使藻种浓度达到10⁶CFU/ml；b将处于稳定生长期的藻液通过镜检，确定无杂菌后离心收集藻泥；c将步骤(2)的藻泥加入配制藻类营养液，制成藻种细胞悬液，藻细胞密度大约≥10²⁰CFU/ml；d配制均质剂：将琼脂粉、右旋糖苷、海藻酸钠按照12:5:1的比例混合，溶于藻类营养液中，加热煮沸5min，冷却备用；e 向(3)中加入0.1-0.25%的均质剂，海水微藻用柠檬酸或乳酸调节pH=4.5-4.8,并添加NaCl（1.5g/L）和MgCl₂（0.075g/L）；f将e步骤的藻种细胞悬液无菌分装在密封的藻种用商品瓶中，避免空气中的杂菌污染。