[发明专利]一种检测猫弓形虫感染的胶体金免疫层析试纸及制备方法

权利要求书

1.一种检测猫弓形虫感染的胶体金免疫层析试纸，包括玻璃纤维、硝酸纤维素膜（NC）、PVC底板、吸水板；其特征在于：

金标垫上的金标抗体为金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA），硝酸纤维素膜上的检测线（T）包被弓形虫表面抗原SAG3、质控线（C）包被兔抗SPA抗体。

2. 权利要求1所述的一种检测猫弓形虫感染的胶体金免疫层析试纸的制备方法，其特征在于：通过表达纯化SAG3重组蛋白，利用柠檬酸三钠还原法烧制胶体金溶液，之后利用胶体金溶液对SPA进行标记，制备金标垫，组装试纸条；其中，

1）重组蛋白SAG3诱导表达

（a）取3μL原核表达的SAG3菌液，5μL卡那霉素置于5mL的 LB培养基中，转入37℃恒温振荡培养箱中，150r/min，振荡过夜；

（b）取振荡过夜的菌液转移至300mL的LB培养基中，同时加入300μL的卡那霉素，封口后转入37℃恒温震荡培养箱中进行恒温振荡培养，1.5h~2h；

（c）加入300μL的IPTG进行诱导，4~5h后4℃离心机7000r×7min，收集菌液；

（d）取PBS对步骤c）收集的菌液进行重悬，超声破碎，离心弃上清；

（e）用2mol/L尿素对沉淀进行充分吹打溶解后离心，弃上清；反复进行5次；

（f）用8mol/L尿素对洗后的沉淀进行溶解；

（g）离心后，取上清即得；

2）SAG3重组蛋白的纯化

（a）将透析袋放入去离子水浸泡5min激活；

（b）取重组蛋白放入激活的透析袋中密封；

（c）将透析袋加入6mol/L尿素溶液中，4℃条件下进行搅拌透析5h；

（d）按第（3）步分别通过4mol/L、2mol/L、1mol/L、0.5mol/L尿素进行梯度透析， 用PBS将尿素置换；

（e）将步骤4）产物4℃、12000 r/min条件下离心5min，取上清-20℃保存；

（f）SDS-PAGE电泳；

3）胶体金试纸条的制备

取21mm的NC膜贴于PVC底板上；金标垫压在NC膜上，样品垫压在金标垫上，吸水纸压在NC膜上粘在底板上；取试纸条进行抗体的包被划线，检测线（T）划纯化的SAG3蛋白、质控线（C）划兔抗SPA抗体。