[发明专利]人hsa‑miR‑124a‑3pPCR检测方法及其在DS妊娠风险预测中的应用在审
| 申请号： | 201710475484.9 | 申请日： | 2017-06-21 |
| 公开（公告）号： | CN107236804A | 公开（公告）日： | 2017-10-10 |
| 发明（设计）人： | 张波;李胜蓝;罗娟;吴柳 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第三军医大学第一附属医院 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 重庆市前沿专利事务所(普通合伙)50211 | 代理人： | 邹晓艳 |
| 地址： | 400038 重*** | 国省代码： | 重庆;85 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | hsa mir 124 ppcr 检测 方法 及其 ds 妊娠 风险 预测 中的 应用 | ||
1.一种人hsa-miR-124a-3p PCR检测方法，其特征在于：包括如下步骤：
1)提取待测人血浆样品的总RNA；
2)对提取的RNA利用RT-qPCR进行检测：
A、RT反应：RT引物序列为：
5′-GTCGTATCCAGTGCGTGTCGTGGAGTCGGCAATTGCACTGGATACGACGGCATTC-3′，RT反应程序：16℃30min，42℃30min，85℃5min；
B、qPCR反应：qPCR反应程序为：50℃2min，95℃10min；95℃15s，60℃60s，35个循环；
3)建立标准曲线，计算待测样品中的hsa-miR-124a-3p浓度。
2.如权利要求1所述的人hsa-miR-124a-3p PCR检测方法，其特征在于：RT反应体系为：RT反应混合物7μL、0.1pmol/μL的hsa-miR-124a-3p标准品5μL、100pmol/μL的RT引物3μL，其中RT反应混合物由如下组分组成：0.15μL dNTPs、1μL 50U/μL的MultiScribeTMReverse Transcriptase、1.5μL 10×Reverse Transcription Buffer、0.19μL 20U/μL的RNase Inhibitor、4.16μLRnase-free water；qPCR反应体系由如下组分组成：1μLSmall RNA assays、1.33μL RT反应产物、10μLmaster mix with UNG、7.67μL Rnase-free water。
3.一种权利要求1或2所述的人hsa-miR-124a-3p PCR检测方法在DS妊娠风险预测中的应用，其特征在于，将采用权利要求1或2所述的方法测得的待测样品的hsa-miR-124a-3p浓度应用到DS妊娠风险预测中，将10-5至10-3pmol/μL确定为权利要求1所述的检测方法的DS高危风险的区间值。
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