[发明专利]大肠杆菌O157:H7和鼠伤寒沙门氏菌共检测试纸及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种大肠杆菌O157:H7和鼠伤寒沙门氏菌共检测试纸，其特征在于，包括底板；附着在所述底板上的样品垫；平行设置在所述底板上且互不接触的第一吸收性条带和第二吸收性条带；

所述第一吸收性条带和第二吸收性条带分别包括依次附着于所述底板上的结合垫、反应膜和吸水垫；所述反应膜的一端与所述结合垫相连、另一端与所述吸水垫相连；所述第一吸收性条带和第二吸收性条带的结合垫分别与所述样品垫相连；

其中一条吸收性条带的结合垫上包被有铂钯纳米颗粒-鼠源鼠伤寒沙门氏菌单克隆抗体复合物，反应膜上靠近所述结合垫的一端设置有测试线、靠近所述吸水垫的一端设置有质控线，所述测试线上包被羊源鼠伤寒沙门氏菌单克隆抗体，所述质控线上包被羊抗鼠IgG抗体；

其中另一条吸收性条带的结合垫上包被有铂钯纳米颗粒-鼠源大肠杆菌O157:H7单克隆抗体复合物，反应膜上靠近所述结合垫的一端设置有测试线、靠近所述吸水垫的一端设置有质控线，所述测试线上包被羊源大肠杆菌O157:H7单克隆抗体，所述质控线上包被羊抗鼠IgG抗体。

2.根据权利要求1所述的试纸，其特征在于，羊源鼠伤寒沙门氏菌单克隆抗体的浓度为0.5-1.5mg/mL，优选为1.0mg/mL；和/或，

羊源大肠杆菌O157:H7单克隆抗体的浓度为0.5-1.5mg/mL，优选为1.0mg/mL；和/或，

所述羊抗鼠IgG抗体的浓度为0.5-1.5mg/mL，优选为0.5mg/mL。

3.根据权利要求1或2所述的试纸，其特征在于，所述样品垫和所述反应膜具有1-2mm左右的重叠区；所述吸水垫和所述反应膜具有1-2mm左右的重叠区。

4.根据权利要求1-3任一项所述的试纸，其特征在于，所述样品垫的长度为18mm，所述反应膜的长度为20mm，所述吸水垫的长度为20mm；优选地，所述检测线距离所述样品垫的垂直距离为6mm，所述质控线距离所述吸水垫的垂直距离为6mm。

5.根据权利要求1-4任一项所述的试纸，其特征在于，所述检测线和质控线均与所述反应膜的轴线垂直。

6.根据权利要求1-5任一项所述的试纸，其特征在于，所述样品垫为三角形，其底边与所述结合垫相连；和/或，

所述试纸还包括覆盖于所述样品垫上和/或覆盖于所述吸水垫上的固定膜。

7.权利要求1-6任一项所述试纸的制备方法，其特征在于，所述铂钯纳米颗粒-鼠源鼠伤寒沙门氏菌单克隆抗体复合物以及铂钯纳米颗粒-鼠源大肠杆菌O157:H7单克隆抗体复合物的制备方法如下：

1)铂钯纳米颗粒的制备

首先，配置20mM的四氯铂酸钾溶液(K₂Ptcl₄)、20mM的四氯钯酸钠溶液(Na₂Pdcl₄)、6M的盐酸溶液和100mM的抗坏血酸溶液；然后，称取20mg F127溶解于1.8mL四氯铂酸钾溶液(20mM)中，再加入0.2mL四氯钯酸钠溶液(20mM)，超声3-5min使F127完全溶解；继续加入44μL的HCl(6M)和2mL的抗坏血酸溶液(100mM)，超声处理4小时；在13000rpm离心5分钟后，吸取去上清后用丙酮洗涤沉淀，重复三次；最后，再将沉淀物溶解于5mL的水中，获得铂钯纳米颗粒；

2)铂钯纳米颗粒-抗体复合物的制备

首先，配置0.02M的碳酸钾溶液、PBS稀释的1mg/mL的鼠源大肠杆菌O157:H7单克隆抗体溶液、PBS稀释的1mg/mL的鼠源鼠伤寒沙门氏菌单克隆抗体溶液、2％的牛血清白蛋白溶液、10％的牛血清白蛋白溶液和复溶液；所述复溶液含有2％的牛血清白蛋白和3％的蔗糖；

然后将上述步骤1)合成的铂钯纳米颗粒用水稀释20-50倍，用0.02M的碳酸钾溶液调节pH至8.2-8.5；取1mL上述溶液，加入5μL-10μL的鼠源大肠杆菌O157:H7单克隆抗体溶液或鼠源鼠伤寒沙门氏菌单克隆抗体溶液，在室温下震荡1h；继而加入110μL的牛血清白蛋白溶液(10％)，得到溶液中的牛血清白蛋白终浓度为1％，并在室温下震荡30min；在10000rpm离心20分钟后，吸取去上清后用牛血清白蛋白溶液(2％)清洗，重复三次；

最后，再将沉淀物溶解于100μL的所述复溶液中，所得。

8.权利要求1-6任一项所述试纸在共检测大肠杆菌O157:H7和鼠伤寒沙门氏菌上的应用。