[发明专利]大肠杆菌O157:H7和鼠伤寒沙门氏菌共检测试纸及其制备方法与应用在审
申请号: | 201710481222.3 | 申请日: | 2017-06-22 |
公开(公告)号: | CN107290540A | 公开(公告)日: | 2017-10-24 |
发明(设计)人: | 罗云波;许文涛;程楠;黄昆仑;徐瑗聪;杨湛森;贺晓云 | 申请(专利权)人: | 中国农业大学 |
主分类号: | G01N33/577 | 分类号: | G01N33/577;G01N33/569 |
代理公司: | 北京路浩知识产权代理有限公司11002 | 代理人: | 王文君,姚自奇 |
地址: | 100193 *** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 大肠杆菌 o157 h7 伤寒 沙门氏菌 检测 试纸 及其 制备 方法 应用 | ||
技术领域
本发明属于食品安全中食源性致病微生物检测领域,涉及一种基于纳米酶的免疫层析试纸的制备方法,以铂钯纳米颗粒代替传统的胶体金作为信号元件以提高灵敏度,以平行双通道设计代替单条多检测线设计以提高特异性,建立一种灵敏度强、特异性好的生物传感器检测技术,用于常见的食源性致病菌大肠杆菌O157:H7和鼠伤寒沙门氏菌的现场快速检测。
背景技术
纳米酶是近年来发现的一种在生物传感器构建中性能良好的信号元件,因这类纳米颗粒具有酶的催化活性而得名。通常,基于纳米酶的生物传感器可以提高灵敏度、降低最低检出限,源于纳米酶不仅可以提供纳米材料本身的颜色作为信号,还可以在加入反应底物都生产另外的颜色以提高信号强度。在众多纳米酶中,铂钯纳米颗粒是一种具有类辣根过氧化物酶活性的材料,具有催化活性强、比表面积大、稳定性强的特点。
食源性病原菌严重威胁到人类的健康和生命,每年有很多人因此生病、住院甚至死亡,而且由于很多致病菌的感染剂量非常低(例如肠出血性大肠杆菌O157:H7和鼠伤寒沙门氏菌的感染剂量低至10个细胞),所以简单、快速、灵敏、可靠地检测细菌对人类的生命健康至关重要。然而传统的检测方法,例如培养的方法、酶联免疫吸附法(ELISA)具有耗时长、灵敏度低等缺点,而PCR的方法灵敏度虽然高,但是通常需要进行样品前处理而且需要专业人员操作且步骤较繁琐从而限制了其应用,迫切需要更为灵敏、快速的检测技术。另外,如果能够实现在一个检测平台上对这两种致病菌同时检测,将会为食品安全和人类健康提供重要的技术保障。试纸是一种便携、廉价、简单、快速的检测平台,已经广泛应用在验孕领域,并在食品安全和环境监测领域有很多初步的尝试。但是,这些试纸一般采用胶体金颗粒作为信号元件,使得灵敏度较差;另外,在多靶标检测的检测中均采用单条多检测线的设计,使得交叉反应难以克服。
发明内容
本发明的目的是针对上述现有技术的缺陷,提供一种灵敏度高、特异性强的试纸条制备方法,用于同时大肠杆菌O157:H7和鼠伤寒沙门氏菌。为了提高试纸的检测灵敏度,本发明以铂钯纳米颗粒代替传统的胶体金作为信号元件;为了提高多重试纸的特异性,本发明采用了平行双通道设计。
本发明采用以下技术方案:
一种大肠杆菌O157:H7和鼠伤寒沙门氏菌共检测试纸,包括底板;附着在所述底板上的样品垫;平行设置在所述底板上且(除所述样品垫外)互不接触的第一吸收性条带和第二吸收性条带;
所述第一吸收性条带和第二吸收性条带分别包括依次附着于所述底板上的结合垫、反应膜和吸水垫;所述反应膜的一端与所述结合垫相连、另一端与所述吸水垫相连;所述第一吸收性条带和第二吸收性条带的结合垫分别与所述样品垫相连;
其中一条吸收性条带的结合垫上包被有铂钯纳米颗粒-鼠源鼠伤寒沙门氏菌单克隆抗体复合物,反应膜上靠近所述结合垫的一端设置有测试线、靠近所述吸水垫的一端设置有质控线,所述测试线上包被羊源鼠伤寒沙门氏菌单克隆抗体,所述质控线上包被羊抗鼠IgG抗体;
其中另一条吸收性条带的结合垫上包被有铂钯纳米颗粒-鼠源大肠杆菌O157:H7单克隆抗体复合物,反应膜上靠近所述结合垫的一端设置有测试线、靠近所述吸水垫的一端设置有质控线,所述测试线上包被羊源大肠杆菌O157:H7单克隆抗体,所述质控线上包被羊抗鼠IgG抗体。
进一步地,羊源鼠伤寒沙门氏菌单克隆抗体的浓度为0.5-1.5mg/mL,优选为1.0mg/mL。
进一步地,羊源大肠杆菌O157:H7单克隆抗体的浓度为0.5-1.5mg/mL,优选为1.0mg/mL。
进一步地,所述羊抗鼠IgG抗体的浓度为0.5-1.5mg/mL,优选为0.5mg/mL。
进一步地,所述样品垫为三角形,其底边与所述结合垫相连。
进一步地,所述两条吸收性条带的结合垫可以相连或接触。
进一步地,所述试纸还可包括覆盖于所述样品垫上和/或覆盖于所述吸水垫上的固定膜。所述固定膜可以促进试纸中各组件的稳固性,优选为防水材质例如PE保护膜。所述固定膜还具有避免样品或试剂与外界环境中的物质发生反应的作用。
进一步地,所述样品垫和所述反应膜具有1-2mm左右的重叠区;所述吸水垫和所述反应膜具有1-2mm左右的重叠区。重叠区保证了样品液流动的连续性,使反应能够充分发生,有效地降低了实验误差。
进一步地,所述底板为PVC材料或塑料材质;所述样品垫、结合垫、反应膜均可为硝酸纤维膜或玻璃纤维棉;所述吸水垫可为吸水性材料,例如吸水纸。
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