[发明专利]钝顶螺旋藻活性蛋白的制备方法在审
| 申请号： | 201710482525.7 | 申请日： | 2017-06-22 |
| 公开（公告）号： | CN107312063A | 公开（公告）日： | 2017-11-03 |
| 发明（设计）人： | 江爱华 | 申请（专利权）人： | 乐清瑞耀食品技术有限公司 |
| 主分类号： | C07K1/36 | 分类号： | C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/16 |
| 代理公司： | 北京华仲龙腾专利代理事务所(普通合伙)11548 | 代理人： | 李静 |
| 地址： | 325600 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 螺旋藻 活性 蛋白 制备 方法 | ||
1.钝顶螺旋藻活性蛋白的制备方法，包括粗蛋白的提取、盐析、透析、纯化，其特征在于：所述粗蛋白的提取步骤为：在藻粉中加入蒸馏水，抽滤，洗涤，加入磷酸盐缓冲液和活性多肽，搅拌均匀，反复冻融，离心，上清液即为粗蛋白液。
2.根据权利要求1所述的钝顶螺旋藻活性蛋白的制备方法，其特征在于：所述粗蛋白的提取步骤中藻粉与蒸馏水的料液比为1:2~3。
3.根据权利要求1所述的钝顶螺旋藻活性蛋白的制备方法，其特征在于：所述粗蛋白的提取步骤中磷酸盐缓冲液的pH为6.5~7、浓度为0.008~0.012mol/L，藻粉与磷酸盐缓冲液的重量体积比为1:14~16。
4.根据权利要求1所述的钝顶螺旋藻活性蛋白的制备方法，其特征在于：所述粗蛋白的提取步骤中活性多肽的添加量为藻粉的0.5~0.8%，活性多肽的氨基酸序列为HSHACASYSRCYCRCLRCRPGCVNCYRCSR。
5.根据权利要求1所述的钝顶螺旋藻活性蛋白的制备方法，其特征在于：所述粗蛋白的提取步骤中快速冷冻的温度为-22~-20℃，解冻温度为3~5℃，反复冻融3~4次。
6.根据权利要求1所述的钝顶螺旋藻活性蛋白的制备方法，其特征在于：所述粗蛋白的提取步骤中离心的温度为3~5℃，速率为10000~12000rpm，时间为28~33min。
7.根据权利要求1所述的钝顶螺旋藻活性蛋白的制备方法，其特征在于：所述盐析步骤为：加入壳聚糖溶液，调节pH，搅拌，离心，将上清液放入冰水浴中，加入硫酸铵使其浓度为50~55wt%，搅拌至硫酸铵完全溶解，静置过夜后离心，即得盐析沉淀物。
8.根据权利要求7所述的钝顶螺旋藻活性蛋白的制备方法，其特征在于：所述盐析步骤中壳聚糖溶液的浓度为1.8~2.2wt%，藻粉与壳聚糖溶液的重量体积比为1:4~6。
9.根据权利要求1所述的钝顶螺旋藻活性蛋白的制备方法，其特征在于：所述纯化步骤中羟基磷灰石用缓冲液浸泡10~12h。
10.根据权利要求1所述的钝顶螺旋藻活性蛋白的制备方法，其特征在于：所述纯化步骤中层析柱规格为直径2~3cm，长48~52cm，缓冲液选用pH为6.5~7、浓度为0.008~0.012mol/L的磷酸盐缓冲液和0.1~0.12mol/L的KCl缓冲液，流速为0.6~0.8ml/min。
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