[发明专利]一种具有改善记忆功效的多肽及其分离制备方法和用途有效
申请号: | 201710484352.2 | 申请日: | 2017-06-23 |
公开(公告)号: | CN107325154B | 公开(公告)日: | 2020-11-20 |
发明(设计)人: | 赵谋明;苏国万;赵诩君 | 申请(专利权)人: | 广东华肽生物科技有限公司 |
主分类号: | C07K7/06 | 分类号: | C07K7/06;C12P21/06;C07K1/20;C07K1/14;A61K38/08;A61P25/28;A23L33/18 |
代理公司: | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人: | 郭炜绵 |
地址: | 526238 广东省肇庆市*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 具有 改善 记忆 功效 多肽 及其 分离 制备 方法 用途 | ||
1.一种多肽,其特征在于:C端至N端的氨基酸序列为Tyr-Ser-Gly-Val-Cys。
2.权利要求1所述多肽的分离制备方法,其特征在于包括如下步骤:
(1)将凤尾鱼去头去内脏,绞成肉糜,加入肉糜质量2倍的水,加入凤尾鱼肉糜质量0.25%的木瓜蛋白酶0.25%的Alcalase 2.4L,在55℃下保温水解7h,酶解结束后在95℃温度下加热15min进行灭酶,冷却至室温后,离心,过滤收集滤液,为凤尾鱼酶解液;
(2)将凤尾鱼酶解液添加至Sephadex G-25凝胶柱,用去离子水以0.5mL/min的流速进行洗脱,检测波长为220nm,收集各洗脱峰并测定其对受损PC12细胞存活率的影响,选取使得受损PC12细胞存活率最高的组分进行下一步分离;
(3)采用反相高效液相色谱对步骤(2)选取的目标组分进一步纯化,收集各洗脱峰并测定其对受损PC12细胞存活率的影响,使受损PC12细胞存活率最高的组分即为权利要求 1所述的多肽,其C端至N端的氨基酸序列为Tyr-Ser-Gly-Val-Cys;
所述的受损PC12细胞为谷氨酸损伤的PC12细胞。
3.根据权利要求2所述的分离制备方法,其特征在于:步骤(1)所述的灭酶是将反应物在95℃下加热15min。
4.根据权利要求2所述的分离制备方法,其特征在于:步骤(1)所述的离心是在3500r/min转速下离心10min。
5.根据权利要求2所述的分离制备方法,其特征在于:
步骤(3)所述的反相高效液相色谱优选以下参数:Waters e2695 HPLC,2998 PDA检测器,色谱柱为XBridgeTM Prep BEH130 C18柱,流动相为A相和B相;A相是质量分数0.1%的三氟乙酸超纯水溶液,B相为甲醇;
洗脱程序为:0-1min内A:B体积比为90:10,1-35min内A:B体积比为90:10-70:30,35-36min内A:B体积比为70:30,36-40min内A:B体积比为70:30-90:10,流速为1mL/min,检测波长为220nm。
6.权利要求1所述的多肽在制备具有改善记忆功效的药品、保健品或食品中的应用。
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