[发明专利]一种单克隆细胞株及其在测定IL‑6R抑制剂相对生物学活性中的应用

权利要求书

1.一种单克隆细胞株，其特征在于，所述单克隆细胞株为携带有受SIE调控的荧光素酶基因且能稳定表达荧光素酶的体外培养的哺乳动物细胞。

2.根据权利要求1所述的单克隆细胞株，其特征在于，所述哺乳动物细胞为人肾上皮细胞293T细胞。

3.根据权利要求1所述的单克隆细胞株，其特征在于，所述单克隆细胞株命名为293T-SIE，其保藏编号为CGMCC No.13816，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。

4.一种如权利要求1～3中任一项所述的单克隆细胞株的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

a)构建携带有受SIE调控的荧光素酶基因的质粒；

b)利用阳离子脂质体将步骤a)所述的质粒转染入人肾上皮细胞293T细胞；

c)在步骤b)转染后的细胞中加入潮霉素b，经过加压筛选，分离获得单克隆细胞株293T-SIE并冻存。

5.根据权利要求4所述的单克隆细胞株的构建方法，其特征在于，还包括单克隆细胞株293T-SIE的荧光素酶活性的鉴定步骤。

6.根据权利要求4所述的单克隆细胞株的构建方法，其特征在于，所述潮霉素b的浓度为0～1mg/ml。

7.一种如权利要求1～3中任一项所述的单克隆细胞株在筛选IL-6R抑制类药物中的应用。

8.一种采用如权利要求1～3中任一项所述的单克隆细胞株测定IL-6R抑制剂相对生物学活性的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)单克隆细胞株293T-SIE的复苏、传代及接种：取出冻存的293T-SIE细胞，将细胞快速融化复苏后，于培养箱中培养；取处于对数生长期的细胞用胰酶消化，离心弃上清液，将细胞重悬于细胞培养液中，将细胞悬液稀释后接种至孔板；

(2)配制IL-6工作液、参比品溶液及待测样品溶液，根据测定需求分别将IL-6工作液、参比品溶液及待测样品溶液加入已接种单克隆细胞株293T-SIE的孔板中；

(3)将化学发光底物与含有细胞裂解液的底物缓冲液混匀，加至孔板，室温震荡一定时间；

(4)使用酶标仪读取各孔的化学发光强度，并对测定的数据进行处理，计算参比品及待测样品的半数有效浓度IC₅₀，并计算IL-6R抑制剂的相对生物学活性。

9.根据权利要求8所述的测定IL-6R抑制剂相对生物学活性的方法，其特征在于，所述步骤(2)IL-6工作液、参比品溶液及待测样品溶液的配制过程如下：

IL-6工作液：取预订量的人重组IL-6粉末，加入无菌水溶解，得到IL-6储存液；取IL-6储存液，用细胞培养液稀释，得到预定浓度的IL-6工作液；

参比品溶液：取IL-6R抑制剂参比品，以细胞培养液对参比品按预定比例依次稀释，得到多个不同浓度梯度的参比品溶液；

待测样品溶液：取待测样品，以细胞培养液对待测样品按预定比例依次稀释，得到多个不同浓度梯度的待测样品溶液。

10.根据权利要求8所述的测定IL-6R抑制剂相对生物学活性的方法，其特征在于，所述步骤(4)中IL-6R抑制剂的相对生物学活性的计算公式如下：

待测IL-6R抑制剂相对生物学活性(％)＝参比品IC₅₀/待测样品IC₅₀×100％。