[发明专利]外周血中分选B淋巴细胞的方法、试剂盒及系统、鉴定血源性淋巴肿瘤细胞的试剂盒及系统

说明书

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，具体而言，涉及一种外周血中分选B淋巴细胞的方法、试剂盒及系统、鉴定血源性淋巴肿瘤细胞的试剂盒及系统。

背景技术

恶性淋巴瘤是一组起源于淋巴造血系统的恶性肿瘤的总称。其中高发病率的B细胞非霍奇金淋巴瘤类别中的弥漫性大B细胞淋巴瘤是成人最常见的恶性淋巴瘤。由于淋巴瘤具有高度异质性，其治疗上也差别很大(如放、化疗，手术等)，不同病理类型和分期的淋巴瘤无论从治疗强度还是预后上都存在很大差别。B细胞淋巴瘤的预后和治疗取决于淋巴瘤的具体类型以及分期分级。

在B细胞淋巴瘤病人体内有效分离血源性淋巴瘤细胞，首先必须去除血液中的大量红细胞。目前临床或医学实验中通用的去除红细胞的方法是使用低渗裂解法裂解去除红细胞。然而在低渗裂解过程中，伴随着红细胞的裂解，许多淋巴肿瘤细胞也受到了的损害，使细胞形态与特性发生改变，从而严重影响了后续的一系列针对肿瘤细胞的鉴别性实验。

荧光原位杂交(Fluorescence in situ Hybridization，FISH)技术用于病理组织中的肿瘤细胞检测已有广泛报道。其中一项主要技术应用即为使用荧光标记的染色体着丝粒特异探针对体液中处于间期的肿瘤细胞进行染色体数目的识别(正常细胞染色体为二倍体)，以发现存在于肿瘤细胞内的非二倍体染色体，即超二倍体或多倍体染色体，从而达到识别肿瘤细胞的目的。目前临床上偶有使用某一特定染色体探针检测淋巴瘤细胞的染色体异倍体的报道，但染色体异常细胞可见于血小板增生引起的血中某些白细胞染色体数目异常，或人体内自然形成的某些少量白细胞染色体数目异常，以及染色体探针非特异着色引起的血细胞假阳性染色体数目异常，因此单独进行染色体数目异常检测判断肿瘤细胞势必会有不可忽视的假阳性。

近来已有所报道，原癌基因在淋巴瘤上呈阳性表达的病人，其生存率明显降低。因此，原癌基因的表达可作为判断淋巴瘤病人预后的独立指标之一。目前临床上常规开展的原癌基因表达主要是针对病理标本使用免疫染色方法进行原癌基因蛋白表达的检测。但此类单纯的免疫染色对于那些原癌基因不表达的肿瘤细胞，则会造成不可避免的假阴性判别。

发明内容

本发明旨在提供一种外周血中分选B淋巴细胞的方法、试剂盒及系统、鉴定血源性淋巴肿瘤细胞的试剂盒及系统，以解决现有技术中周血中分选B淋巴细胞容易造成B淋巴细胞损失的技术问题。

为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种从外周血中分选B淋巴细胞的方法。该方法包括以下步骤：S1，采用红细胞密度离心分离介质将外周血细胞中的红细胞去除；以及S2，使用流式细胞分选法将B淋巴细胞从去除了红细胞的外周血细胞中分选出来。

进一步地，红细胞密度离心分离介质在20℃下的比重为1.080～1.081克/毫升，红细胞密度离心分离介质包含：硫酸铁、氯化锌、硝酸铁中的一种和蔗糖。

进一步地，步骤S1具体包括：将外周血离心后去掉血浆，将得到的外周血细胞加入到红细胞密度离心分离介质的顶层，离心，收集上层去除了红细胞的外周血细胞。

进一步地，步骤S2具体包括：将去除了红细胞的外周血细胞加入荧光标记的抗B细胞表面标示物抗体，孵育，然后洗涤除去未结合的荧光标记的抗B细胞表面标示物抗体，使用流式细胞仪分选得到B淋巴细胞。

进一步地，荧光标记的抗B细胞表面标示物抗体特异性地识别下述人的B细胞表面标示物的一种或多种CD5、CD10、CD15、CD19、CD20、CD22、CD30、CD38、CD43、CD45、CD77、CD79a。

根据本发明的另一个方面，提供一种用于从外周血中分选B淋巴细胞的试剂盒。该试剂盒包括：红细胞密度离心分离介质、缓冲液和荧光标记的抗B细胞表面标示物抗体。

进一步地，红细胞密度离心分离介质在20℃下的比重为1.080～1.081克/毫升，红细胞密度离心分离介质包含硫酸铁、氯化锌、硝酸铁中的一种和蔗糖。

进一步地，荧光标记的抗B细胞表面标示物抗体特异性地识别下述人的B细胞表面标示物的一种或多种CD5、CD10、CD15、CD19、CD20、CD22、CD30、CD38、CD43、CD45、CD77、CD79a。

根据本发明的再一个方面，提供一种用于从B细胞淋巴瘤病人的外周血中分选、提取及鉴定血源性淋巴肿瘤细胞的试剂盒。该试剂盒包括：红细胞密度离心分离介质、缓冲液、荧光标记的抗B细胞表面标示物抗体、荧光标记的抗淋巴细胞肿瘤标示物抗体和染色体倍体检测探针。